時間：2022-08-19 23:56:55
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【Abstract】 Objective This study is to investigate the level of matrix metalloproteinase-9(MMP-9)in blood of the patients with cough variant asthma(CVA).Methods To select 30 patients with typical asthma,40 patients with CVA and 20 healthy controls.We detected MMP-9 by enzyme linked immunoabsorbent assay(ELSIA)and detected eosinophil count and lymphocyte count in peripheral blood in the three groups.Results The levels of MMP-9 in plasma of CVA group and typical asthma group were higher than that in healthy group(P0．05);The number of eosinophil in blood of CVA group or typical asthma group was higher than that in healthy group(P0．05);The number of lymphocyte in blood of CVA group was higher than that in typical asthma group and healthy group(P0．05);The relationship between the level of MMP-9 and the eosinophil count or lymphocyte count were both positive correlation.Conclusion CVA is a kind of chronic airway inflammation with eosinophil andlymphocyte,and MMP-9 participates the airway inflammation and airway remodeling in CVA.
典型的支氣管哮喘常有喘息、胸悶、咳嗽三大癥狀，而咳嗽變異性哮喘(cough variant asthma,CVA)，又稱咳嗽型哮喘(cough type asthma)，是指以慢性干咳為主要或唯一臨床表現的一種特殊類型哮喘。隨著病情發展，約30%在幾年內可發展成典型的支氣管哮喘[1]。早期診斷CVA患者并加以正確的治療，可望減少CVA發展成典型的支氣管哮喘的幾率?；|金屬蛋白酶-9(matrix metalloproteinase-9,MMP-9)是MMPs家族的一員，MMP-9參與典型哮喘的氣道重塑及氣道炎癥國內外已有相關報道，但MMP-9是否也參與CVA這種特殊類型哮喘的發病，目前國內外未見相關報道。本研究擬通過觀察CVA患者血清中MMP-9的表達情況及其與外周血中淋巴細胞計數、嗜酸粒細胞計數相關情況，來探討MMP-9在CVA中的作用，為CVA的早期診斷提供依據。
1 對象及方法
1．1 對象 全部病例均為2005年12月至2007年5月在濰坊醫學院附屬醫院門診就診和住院治療的患者，按就診順序將患者分為CVA組和典型哮喘組。CVA組，男19例，女21例，平均(32．1±15．2)歲，病程(10．2±3．6)個月，病例診斷符合標準[2-3]。典型支氣管哮喘組，男14例，女16例，平均（38．5±13．9）歲，病程(11．7±5．4)年，病例診斷符合2003年全國支氣管哮喘防治指南的診斷標準[4]。以上兩組患者均為急性發作期，抽血前1個月均未應用糖皮質激素，無合并心血管疾病、內分泌疾病、免疫風濕病等其他系統疾病，并排除妊娠婦女。健康對照組，男9例，女11例，平均(34．3±11．2)歲，均無過敏性疾病、外傷、腫瘤及其他部位病史。以上三組研究對象均無吸煙史，性別、年齡無顯著性差異。
1．2 方法
1．2．1 血清MMP-9測定 留取空腹靜脈血3 ml，靜置自凝1~2 h后，再用3 000 rmp，離心15 min，分離血清，放入-70℃冰箱保存。使用美國R&D SYSTEMS生產的試劑盒，采用ELISA法測定，具體操作參照藥盒說明。
1．2．2 外周血嗜酸粒細胞、淋巴細胞計數 采外周血按常規計數。
1．3 統計學方法 細胞計數、MMP-9數據用（x±s）表示。多組間均數比較采用方差分析；相關性采用直線相關分析。統計學處理采用SPSS11．0統計軟件分析。取α=0．05為檢驗水準。
2 結果
2．1 CVA組與典型支氣管哮喘組、健康對照組血清中MMP-9水平比較 從表1可見，CVA組與典型哮喘組其血清中MMP-9水平顯著高于健康對照組(P0．05)。
2．2 CVA組與典型支氣管哮喘組、健康對照組外周血嗜酸粒細胞、淋巴細胞計數比較 見表2，CVA組Eos和Lym顯著高于健康對照組(P0．05)，而Lym則顯著高于典型哮喘組(P
2．3 CVA組血清中MMP-9水平與外周血嗜酸細胞計數、淋巴細胞計數相關性分析 由圖1、2可見，CVA組MMP-9水平與外周血嗜酸細胞計數(r=0．581,P
3 討論
支氣管哮喘是由許多細胞和細胞組分參與的氣道慢性炎癥性疾患，病理生理表現為氣流阻塞和氣道高反應性。其病理學基礎涉及氣道炎癥和氣道結構改變。CVA作為一種特殊類型的支氣管哮喘，許多研究表明，其發病機制和病理學改變與典型支氣管哮喘相似?；|金屬蛋白酶(matrix metalloproteinases,MMPs)是一組具有相同功能、結構高度同源、依賴鋅離子的內肽酶的總稱，其主要作用是降解ECM和基底膜。由于MMPs在介導細胞移行和細胞外基質(extral cellear memberma,ECM)重構方面具有獨特的作用，近幾年來，人們開始關注基質金屬蛋白酶及其抑制劑在哮喘發病過程中所發揮的作用。MMP-9是MMPs家族的一員，其水平在支氣管哮喘患者的支氣管肺泡灌洗液(bronchoalveolar lavage fluid,BALF)、痰、血清、血漿中都增加[5]。它不僅能降解氣道和肺的ECM和基底膜，而且能調節其它蛋白酶和細胞因子，在支氣管哮喘的發生發展中起重要作用。
外周血嗜酸粒細胞、淋巴細胞計數表明：CVA是以嗜酸性粒細胞、淋巴細胞浸潤為主的慢性氣道炎癥，其中淋巴細胞較典型哮喘明顯增高，提示哮喘的不同階段，其氣道炎癥的啟動機制是有差別的，詳細機理有待于進一步探討。
CVA患者血清中MMP-9水平與外周血嗜酸粒細胞、淋巴細胞相關性說明：在CVA發病中嗜酸粒細胞、淋巴細胞可能參與或影響了MMP-9的合成與釋放,這與Ohno,Weeks等[6-7]研究結果一致。
本研究分別測定CVA患者和典型支氣管哮喘患者急性發作時血清中MMP-9水平，結果顯示，CVA患者血清中MMP-9水平和典型支氣管哮喘患者一樣都顯著高于健康對照組(P
參考文獻
［1］ Fujimura M,Nishizawa Y,Nishitsuji M,et al.Predictors for typical asthma onset from cough variant asthma.Asthma,2005,42(2)：107-111.
［2］ David J,Lucy M,Osbornk.Cough variant asthma：a review of the clinical literature.Asthma,1991,28：85.
［3］ Corrao WM,Braman SS,Irwin RS,et al.Chronic cough as the sole presenting manifestation of bronchial asthma.N Engl Med,1979,300：633.
［4］ 中華醫學會呼吸病學分會哮喘學組.支氣管哮喘防治指南(支氣管哮喘的定義、診斷、治療及教育和管理方案).中華結核和呼吸雜志,2003,03：132-138.
［5］ Jeffrey J.Atkinson and Robert M.Senior.Matrix Metalloproteinase-9 in Lung Remodeling.Am.J.Respir.Cell Mol.Biol,2003,28(1),12-24.
【關鍵詞】 肝硬化 ip 10 mrna pcr 外周血 轉氨酶
肝硬化是肝臟纖維結締組織彌漫性增生伴有肝細胞結節狀再生, 是肝細胞在多因素作用下反復損傷的慢性病理過程。ifn?γ誘生蛋白10(interferon γ?inducible protein 10, ip?10)是1985年luster等用ifn?γ刺激u937細胞株, 從cdna基因庫中篩選出, 屬cxc家族elr?亞族, 可由ifn?γ、 lps等誘導產生, 介導th1型炎癥反應, 抑制血管新生及腫瘤生長。丙氨酸氨基轉移酶(alanine aminotransferase, alt)與天冬氨酸氨基轉移酶(aspartate aminotransferase, ast)及其ast/alt比值能判斷肝病進展及肝病預后的較好指標[1]。為了解ip?10與血清轉氨酶水平關系及其在肝硬化發病機制中的作用, 篩選39例慢性乙肝后肝硬化患者, 探討其外周血ip?10及其mrna水平, 現將結果報道如下。
1 材料和方法
1.1 材料 ficoll?hypaque分離液購自上海試劑二廠; hbv?dna診斷試劑購自上海中亞基因研究所; elisa法ip?10試劑盒購自法國dlaclone公司; trizol試劑購自美國invitrogen公司; cdna合成試劑購自上海申能博采生物科技有限公司; 半自動生化儀?ecom?f6124購自德國eppendorf公司; exl808全自動酶標儀和exl?50x全自動洗板機購自美國bio?tek公司; lightcycler faststart dna master sybr greenⅰ購自德國roche公司; icycle熒光實時定量pcr儀購自美國bio?rad公司。
1.2 檢測對象 39例肝硬化患者為2006-01/2007-05我校教學醫院收治的患者。其中男27例, 女12例, 年齡31.2～62.5歲, 平均44.5歲, alt升高者18例, ast升高者24例, ast/alt>1.0者27例; 入選患者均為hbv感染者, 臨床診斷符合2005年全國病毒性肝炎會議修訂診斷標準, 病程均超過6個月, 無合并hav、 hcv、 hdv、 hev、 hiv感染的實驗室依據, 無其他自身免疫性疾病, 3個月內未系統使用抗病毒和免疫抑制劑治療。另選25例本市中心血站體檢正常獻血員為對照組, 其中男16例, 女9例, 年齡20.3～42.9歲, 平均32.0歲。
1.3 方法
1.3.1 標本采集 分批采取患者晨起空腹靜脈血5 ml, 分別置2支含肝素的無菌eppendorf管和2支滅菌普通管。肝素抗凝血以ficoll?hypaque常規分離外周血單個核細胞(pbmc), 普通管常規分離血清備檢。
1.3.2 血清ip?10檢測 采用elisa以試劑盒提供標準品繪制標準曲線, 每批檢測設空白、 陰性、 陽性對照各2孔, 取100 μl待測血清和100 μl辣根過氧化物酶（hrp）標記的抗趨化因子單克隆抗體(mab), 加至包被有趨化因子mab的酶標反應板孔內, 37℃孵育1 h, pbs緩沖液洗滌5次, 加100 μl底物3?3甲基苯并噻唑啉?6?磺酸鹽, 室溫30 min, 加2 mol/l h2so4終止反應, 在exl808全自動酶標分析儀上(450±2) nm處讀取a值, 每孔測定2次, 取均值, 依標準曲線確定血清ip?10含量。ip?10最低檢測水平<2 ng/l, 且批內和批間變異系數分別為<5%和<7%。
1.3.3 ip?10 mrna檢測 采用real?time pcr法。將分離的pbmc以rpmi1640培養液調整細胞數至(1～2)×109個/l懸液; 以trizol試劑抽提pbmc總rna, 并逆轉錄為cdna, 置-86℃冰箱備檢。以sybr greenⅰ熒光標記法檢測pcr產物, 總反應體系25 μl, 包括上下游引物各10 pmol, mgcl2 2.5 mmol/l, ex?taq 1.25 u, dntp 2 mmol/l, 1×pcr buffer (500 mmol/l kcl, 100 mmol/l tris, 20 μg/l gelatin, ph8.3), 2×sybrtm greenⅰ液, 2 μl標準品或模板cdna(1∶5稀釋)。趨化因子引物設計參照hirata等方法進行[2, 3], ip?10引物序列和擴增片段長度見表1。pcr擴增參數如下: 95℃預變性300 s, 然后95℃ 50 s, 55℃ 40 s, 72℃ 90 s共35個循環, 最后72℃延伸300 s。以甘油醛?3?磷酸脫氫酶(gapdh)為內對照, 以lg cdna/lg gapdh比值代表其mrna水平。
表1 hbv及ip?10引物序列和擴增片段長度（略）
1.3.4 標準品和標準曲線制備 以gapdh為參照標準, 為確定定量擴增的效率和靈敏度, 將起始濃度為(106 copies/μl)的gapdh, 按1∶10設6個梯度濃度, 即106 copies/μl、 105 copies/μl、 104 copies/μl、 103 copies/μl和102 copies/μl、 0。
1.4 統計學處理 ip?10及其mrna水平以x±s表示; 采用spss11.5軟件進行t檢驗及相關分析, p<0.05有統計學意義。
2 結果
2.1 不同轉氨酶水平患者ip?10表達 rt?pcr顯示肝硬化患者ip?10表達(圖1), elisa及real?time pcr顯示患者外周血ip?10及其mrna水平升高(p<0.05或p<0.01, 圖2), 依alt、 ast水平將患者分為alt、 ast正常組、 升高組, alt、 ast升高組及ast/alt>1.0組外周血ip?10及其mrna水平高于轉氨酶正常組, 差異亦有統計學意義(p<0.05或p<0.01, 圖2)。
圖1 pbmc中ip?10表達（略）
1, 3, 5: gapdh; 2, 4, 6: ip?10; 1, 2: 對照組; 3, 4: 患者1（轉氨酶正常）; 5, 6: 患者2（轉氨酶升高）.
圖2 ip?10及其mrna與轉氨酶關系（略）
ap<0.05, bp<0.01 vs 對照組或相應正常組.
2.2 ip?10表達與轉氨酶水平關系 alt升高組患者血清ip?10水平與alt相關(r=0.6284, p<0.01, 圖3), ast升高組血清ip?10水平與ast明顯相關(r=0.7162, p<0.01, 圖4), ast/alt比值升高組血清ip?10水平與ast/alt比值亦明顯相關(r=0.6970, p<0.01, 圖5)。
圖3 血清ip?10水平與alt相關性（略）
圖4 血清ip?10水平與ast相關性（略）
圖5 血清ip?10水平與ast/alt相關性（略）
3 討論
ip?10為cxc家族elr-趨化因子, 對表達cxcr3受體的t淋巴細胞、 單核細胞等產生趨化游走。本研究結果顯示, hbv感染后肝硬化患者外周血ip?10及其mrna水平增高, 與對照組相比, 差異有統計學意義(p<0.01); pbmc內ip?10 mrna與血清ip?10蛋白水平具有一致性, 提示 pbmc內ip?10 mrna可能是導致血清ip?10水平升高的重要原因。chuang等[4]研究顯示ip?10在原發性膽汁性肝硬變患者血漿中明顯升高, 且和病情的嚴重程度相關。趙金紅等[5]研究表明ip?10在慢性乙肝中表達升高, 介導炎癥反應, 參與乙型肝炎慢性化。hbv感染后肝硬化患者體內ip?10表達增高可能的原因為: ①肝硬化患者存在一定程度的免疫功能紊亂, 肝清除能力下降, 內毒素生成增加, il?1和tnf?α生成, tnf?α、 il?1β、 和ifn?γ通過ifn調節因子家族p48和2個stat?1形成命名為ifn激活因子3的三聚體, 與ifn刺激元件(isre)結合后, 從而驅動ip?10 mrna表達[6]。②肝硬化進程中,隨著肝細胞的逐漸壞死, 膠原合成及膠原沉積不斷增加, 在肝細胞炎性改變的基礎上纖維化程度逐漸加重, 血清ip?10水平升高。③肝硬化患者常伴有不同程度的門脈高壓、 一定程度胃腸道菌群失調、 腸黏膜缺血缺氧, g-菌及其產物lps等經破損黏膜入血, ip?10分泌增加。④肝硬化患者全身高動力循環狀態, 門脈高壓, ip?10可維持血管穩態, 可能作為免疫抑制劑, 發揮潛在的抗腫瘤作用。
本實驗結果顯示, 肝硬化患者血清ip?10含量與alt水平呈正相關, 表明ip?10水平在一定程度上反應肝硬化的炎癥活動狀況, 對了解肝硬化的進展有重要意義。hbv感染的肝細胞損傷主要來自宿主的免疫應答[7], 機體內免疫復合物增加, 刺激機體產生大量tnf?α、 il?6等前炎癥因子, 這些因子本身可誘使肝臟微循環障礙, 血液通透性增加, 全身高動力循環, 肝細胞水腫變性, 繼而壞死, alt大量釋放入血, ip?10表達增強。王健等[8, 9]研究發現在慢性乙肝及丙型肝炎中ip?10表達水平升高且和alt表達水平呈正相關, 參與肝炎的慢性化進程。同時血清內ip?10含量與ast水平呈正相關。一般情況下, ast升高幅度不及alt, 隨著hbv的感染持續, 肝硬化程度加重, 機體內毒素水平升高, 可直接殺傷正常和hbv感染肝細胞, 引起肝細胞黃疸, 血清膽紅素升高, 形成肝臟炎癥損害, 使ip?10活性增加。nishioji等[10]研究表明慢性乙肝中血清ip?10水平較正常對照組明顯升高, 且和血清轉氨酶水平成正相關。ast/alt是反映肝細胞損傷嚴重程度和評估預后發展的重要指標。本研究結果提示ast/alt>1.0組血清ip?10水平明顯高于ast/alt≤1.0組。生理情況下ast/alt比值約1.15, 肝細胞受損初期比值先下降, 隨著細胞受損加重, 比值呈上升趨勢, 肝硬化患者線粒體破壞, ast明顯升高, ast/alt>1.0甚至>2.0。ip?10對th1型細胞等有較強的趨化作用, 使其聚集到炎癥部位, 在清除病毒的同時產生溶酶體酶、 氧自由基等炎性介質加重肝細胞損傷。
綜上所述, 在hbv感染后肝硬化患者外周血ip?10及其mrna表達水平升高, 與肝細胞損傷程度密切相關, 在清除病毒的同時加重炎癥反應, 在肝炎后肝硬化發病機制中起重要作用。
【參考文獻】
肝硬化是肝臟纖維結締組織彌漫性增生伴有肝細胞結節狀再生, 是肝細胞在多因素作用下反復損傷的慢性病理過程。ifn?γ誘生蛋白10(interferon γ?inducible protein 10, ip?10)是1985年luster等用ifn?γ刺激u937細胞株, 從cdna基因庫中篩選出, 屬cxc家族elr?亞族, 可由ifn?γ、 lps等誘導產生, 介導th1型炎癥反應, 抑制血管新生及腫瘤生長。丙氨酸氨基轉移酶(alanine aminotransferase, alt)與天冬氨酸氨基轉移酶(aspartate aminotransferase, ast)及其ast/alt比值能判斷肝病進展及肝病預后的較好指標[1]。為了解ip?10與血清轉氨酶水平關系及其在肝硬化發病機制中的作用, 篩選39例慢性乙肝后肝硬化患者, 探討其外周血ip?10及其mrna水平, 現將結果報道如下。
1 材料和方法
1.1 材料 ficoll?hypaque分離液購自上海試劑二廠; hbv?dna診斷試劑購自上海中亞基因研究所; elisa法ip?10試劑盒購自法國dlaclone公司; trizol試劑購自美國invitrogen公司; cdna合成試劑購自上海申能博采生物科技有限公司; 半自動生化儀?ecom?f6124購自德國eppendorf公司; exl808全自動酶標儀和exl?50x全自動洗板機購自美國bio?tek公司; lightcycler faststart dna master sybr greenⅰ購自德國roche公司; icycle熒光實時定量pcr儀購自美國bio?rad公司。
1.2 檢測對象 39例肝硬化患者為2006-01/2007-05我校教學醫院收治的患者。其中男27例, 女12例, 年齡31.2～62.5歲, 平均44.5歲, alt升高者18例, ast升高者24例, ast/alt>1.0者27例; 入選患者均為hbv感染者, 臨床診斷符合2005年全國病毒性肝炎會議修訂診斷標準, 病程均超過6個月, 無合并hav、 hcv、 hdv、 hev、 hiv感染的實驗室依據, 無其他自身免疫性疾病, 3個月內未系統使用抗病毒和免疫抑制劑治療。另選25例本市中心血站體檢正常獻血員為對照組, 其中男16例, 女9例, 年齡20.3～42.9歲, 平均32.0歲。
1.3 方法
1.3.1 標本采集 分批采取患者晨起空腹靜脈血5 ml, 分別置2支含肝素的無菌eppendorf管和2支滅菌普通管。肝素抗凝血以ficoll?hypaque常規分離外周血單個核細胞(pbmc), 普通管常規分離血清備檢。
1.3.2 血清ip?10檢測 采用elisa以試劑盒提供標準品繪制標準曲線, 每批檢測設空白、 陰性、 陽性對照各2孔, 取100 μl待測血清和100 μl辣根過氧化物酶（hrp）標記的抗趨化因子單克隆抗體(mab), 加至包被有趨化因子mab的酶標反應板孔內, 37℃孵育1 h, pbs緩沖液洗滌5次, 加100 μl底物3?3甲基苯并噻唑啉?6?磺酸鹽, 室溫30 min, 加2 mol/l h2so4終止反應, 在exl808全自動酶標分析儀上(450±2) nm處讀取a值, 每孔測定2次, 取均值, 依標準曲線確定血清ip?10含量。ip?10最低檢測水平<2 ng/l, 且批內和批間變異系數分別為<5%和<7%。
1.3.3 ip?10 mrna檢測 采用real?time pcr法。將分離的pbmc以rpmi1640培養液調整細胞數至(1～2)×109個/l懸液; 以trizol試劑抽提pbmc總rna, 并逆轉錄為cdna, 置-86℃冰箱備檢。以sybr greenⅰ熒光標記法檢測pcr產物, 總反應體系25 μl, 包括上下游引物各10 pmol, mgcl2 2.5 mmol/l, ex?taq 1.25 u, dntp 2 mmol/l, 1×pcr buffer (500 mmol/l kcl, 100 mmol/l tris, 20 μg/l gelatin, ph8.3), 2×sybrtm greenⅰ液, 2 μl標準品或模板cdna(1∶5稀釋)。趨化因子引物設計參照hirata等方法進行[2, 3], ip?10引物序列和擴增片段長度見表1。pcr擴增參數如下: 95℃預變性300 s, 然后95℃ 50 s, 55℃ 40 s, 72℃ 90 s共35個循環, 最后72℃延伸300 s。以甘油醛?3?磷酸脫氫酶(gapdh)為內對照, 以lg cdna/lg gapdh比值代表其mrna水平。
表1 hbv及ip?10引物序列和擴增片段長度（略）
1.3.4 標準品和標準曲線制備 以gapdh為參照標準, 為確定定量擴增的效率和靈敏度, 將起始濃度為(106 copies/μl)的gapdh, 按1∶10設6個梯度濃度, 即106 copies/μl、 105 copies/μl、 104 copies/μl、 103 copies/μl和102 copies/μl、 0。
1.4 統計學處理 ip?10及其mrna水平以x±s表示; 采用spss11.5軟件進行t檢驗及相關分析, p<0.05有統計學意義。
2 結果
2.1 不同轉氨酶水平患者ip?10表達 rt?pcr顯示肝硬化患者ip?10表達(圖1), elisa及real?time pcr顯示患者外周血ip?10及其mrna水平升高(p<0.05或p<0.01, 圖2), 依alt、 ast水平將患者分為alt、 ast正常組、 升高組, alt、 ast升高組及ast/alt>1.0組外周血ip?10及其mrna水平高于轉氨酶正常組, 差異亦有統計學意義(p<0.05或p<0.01, 圖2)。
圖1 pbmc中ip?10表達（略）
1, 3, 5: gapdh; 2, 4, 6: ip?10; 1, 2: 對照組; 3, 4: 患者1（轉氨酶正常）; 5, 6: 患者2（轉氨酶升高）.
圖2 ip?10及其mrna與轉氨酶關系（略）
ap<0.05, bp<0.01 vs 對照組或相應正常組.
2.2 ip?10表達與轉氨酶水平關系 alt升高組患者血清ip?10水平與alt相關(r=0.6284, p<0.01, 圖3), ast升高組血清ip?10水平與ast明顯相關(r=0.7162, p<0.01, 圖4), ast/alt比值升高組血清ip?10水平與ast/alt比值亦明顯相關(r=0.6970, p<0.01, 圖5)。
圖3 血清ip?10水平與alt相關性（略）
圖4 血清ip?10水平與ast相關性（略）
圖5 血清ip?10水平與ast/alt相關性（略）
3 討論
[起跑準備]
制訂計劃要趁早
問題：什么時候訂計劃、怎樣訂計劃最好
在初三學習中，學習目標和計劃起著舉足輕重的作用，如果沒有盡早明確學習計劃，學習勁頭、效果就會打折扣，成績也難以提高。初三生要對自己有客觀認識，盡早制訂好適合自己的每周學習計劃。計劃既不要過簡，也不必過繁，要有的放矢，可操作性強。學生的學習計劃以“周”為單位制訂最有效，這樣不會因為計劃時間過長讓自己厭煩，也容易調整自己的學習狀態。一星期只做6天計劃，把星期天空出來，勞逸結合。初一、初二學習的知識和初三新學期所學的知識是相互關聯的。在學習新知識的同時，學生還要注意復習以前遺漏的、沒掌握的知識點。
[學法導航]
以“漁”獲“魚”七步法
問題：制訂目標后怎樣來一步步實現
對策：學業、生活、心理七步法
1、合理利用和安排時間
“凡事預則立，不預則廢?！眲偵铣跞?，最好能訂一個學習計劃，長遠計劃和近期計劃相結合，最好能細致些，具體到早、午、晚做什么、學什么、復習什么。
2、平衡各科，注意基礎
妥善處理好優勢科目和劣勢科目的關系，盡量保持平衡。專家認為，對剛升上初三的學生來說，各科一般是一邊上新課一邊復習學過的內容，這個時候，相對來講，供學生自由支配的時間多一些，我們可指導學生在自己較差的科目上稍微多花一點精力。而化學這門新學的科目，從一開始就要認真打好基礎，即使不一定成為優科，也不至于成為弱科。
到了中考前三個月，情況就有所不同了?？赡芙涍^幾個月的努力，原來相對較弱的科目已經有了明顯的進步，也可能收效仍不是十分顯著。但這時如果再偏向弱科的話，很可能把比較強的科目也拉了下來。因此，應該在盡量照顧弱勢科目的前提下，全面兼顧各科，并且努力提高優勢科目，以期在優勢科目的考試中與別人拉開差距，彌補弱勢科目的不足。
3、搞好生活，保證學習
從某種意義來說，高考[微博]、中考不僅是智力的競爭，也是體力的競爭，“開夜車”或不午睡，犧牲休息時間去突擊學習會搞垮身體，不值得，實際上也不利于學習?？傊钤接幸幝?，學習成效就越大，成績上升就越快。
4、加強思維能力培養
多思多問課堂上，老師講解的內容相當豐富，并具有很強的邏輯性，他們所講的很多東西往往是多年教學實踐的經驗所得，是課本上根本找不到的，對培養我們的分析、判斷和推理能力具有很大的幫助。所以，課堂上學生一定要緊跟老師的思路，集中注意力聽取他們一些獨特的見解，掌握他們的思維方式及其認知規律，并認真做好筆記。課外，更要多向任課教師請教，以加深理解，拓展知識面。
培養思維能力的另一途徑，就是經常運用邏輯思維進行獨立思考，使自己的思維能力不斷得到鍛煉和提高。
5、仔細分析錯誤，避免重犯
對于做練習或各種測驗中出現的一些錯誤，不能只簡單更正一下就完事，而要認真地加以分析，找出造成錯誤的癥結所在。這些癥結正暴露了我們掌握得不夠牢固的某些薄弱環節，因而要及時地查漏補缺。可建議學生設一個錯題本，通過分析錯題，明白自己的弱點，經常拿錯題本翻翻，可進一步鞏固基礎知識，以避免下一次重犯錯誤。
6、善于歸納和總結
歸納和總結，這是使知識條理化、網絡化和立體化的關鍵一環。
可從兩方面進行總結：
(一)內容上，分科、按體系、分章節。
(二)時間上，每節課后、每次作業后、每輪測驗后、每日、每周、每月，都應及時梳理、鞏固知識點。
7、滿懷信心，提高素質
保持一顆平常心，放松自己的心靈，不要被分數牽著鼻子走，在競爭壓力面前不屈服，在挫折面前不灰心喪氣，學習上盡力而為，即可問心無愧。
[體育攻略]
應對體育測試，從現在就要練起
第二，缺點：1、自己的自制力不強。2、外在因素的誘惑使自己不能投入學習中。3、不夠堅持，缺乏恒心。
我覺得這應該會是一個可實施的學習計劃，因為優點還是大于缺點的，且缺點可以克服。
2、確定目標
每天都要做到看課外書（課余時間）；每周老師布置的作業按時完成（周末）；對于要考試的科目要看書復習（晚自習時間）；寫英語四級試卷（每周2套抽早自習或下午）；每天早上記二十個單詞。一周要去兩三次圖書館；上課要認真聽課并做好記錄、積極回答問題；早上努力學習英語。
3、確定前提條件
不可控制的：上課聽課可能會走神，導致記錄不全面；可能會抑制不住上網的情況；周末可能朋友會找自己逛街而不能推脫，導致周末不能實施計劃。
部分可控制的：比如每天課余時間的看書能不能堅持；一周去圖書館的次數；除開學習娛樂時間。
可控制的：早上起床早自習與晚上的晚自習；按時完成老師布置的作業的時間；寫英語試卷。
這是預期環境，即假設條件。
4、擬定可供選擇的可行方案
對于一周的學習計劃，我覺得我能夠選擇的方案一個。所以，只擬定的可選擇的方案一個。
首先，我想說說它的優點：第一，分配比較合理，不具夸張性。第二，簡單明了。第三，如果有一定的實施性，且實施了效果會很好。
缺點：第一，與預定的目標有一定差距。第二，有些可能不能實現，特別是周末的方案。第三，對于課余時間休息太少（可能有時候會想要上網）。
5、評價可供選擇的方案
1. 這個方案中存在一定的隱患，但是是可以避免的，所以個人覺得問題不大。
2. 個人覺得實施此方案會給豐富自己的業余生活；以及會改善自己經常上網的狀態；還可以是學習能力提升；改善慵懶也是很重要的一方面。
3. 對于每天要完成的學習量，我覺得還是較為合理的，也是可行的。
4. 當然這一計劃不僅會帶來學習上的進步，取得一定的效果，也會使自己的業余生活不那么舒坦，使自己和朋友的溝通變少，生活中少了一份除了 學習以外的樂趣。更重要的是如果沒有實施好就會使自己的時間浪費。
6、選擇方案
我所選定的方案就就一個。所以對于其它方案就沒有制定。只要從它的患處改一下就會成為可實施的方案。
7、制定派生計劃
制定一周的學習計劃，需要時間計劃(合理安排時間)；活動計劃（活動的開展的計劃制定）作為其支撐。這些的合理配置與利用可以大大地提高一周學習效率，是效果清晰明了。
8、編制預算
隨著素質教育和終身教育理念的興起，自主學習理念慢慢融入到大學英語教學中。筆者在教學中發現，學生普遍掌握了一些認知學習策略，但對自主學習要求較高的學習策略，了解并不多，并且在學習過程中，不知道該如何選擇適合自己的學習策略。因此，在學習策略的培養方面，教師需要對學生進行一些培訓和指導。
奧馬利和查莫特（O’Mally&Chamot，1990）根據認知心理學把學習策略分為認知策略（Cognitive Strategies），元認知策略（Meta-cognitive Strategies）和社會、情感策略（Social Mediation）。認知策略主要包括復述，聯想記憶，做筆記，做小結，發現問題，解決問題等策略。元認知策略主要包括制定學習計劃，自我記錄，自我監控，自我評估等策略。社會、情感策略包括怎樣在學習互動活動中放輕松，怎樣制定小組規則，怎樣與他人合作學習，怎樣與人有效的溝通，怎樣評估合作小組伙伴等策略。
教師在向學生介紹和培養學生形成自主學習策略之前，要特別注意矯正學生對英語自主學習策略不正確的看法。教師和學生都要形成對自主學習策略的正確認識：第一，學會如何進行英語學習比學會一些具體的英語單詞或語法點更重要。第二，在英語自主學習過程中，正確地使用適合自己的學習策略，可以提高學習效率。第三，培養學生的責任感。學習策略的選擇和培養不能過分依賴教師，這是學習者自己的責任。第四，對學生英語自主學習策略的培養不是把一些固有的學習策略強加給他們，而是向他們介紹一些經過驗證的、有效的學習策略，幫助他們尋找到適合自己的、個性化的、系統的英語自主學習策略。第五，學習不成功者可以向學習成功者借鑒其英語自主學習策略。第六，對于英語自主學習策略，只停留在了解階段是不行的，必須經過訓練和實踐，從而形成自己的學習策略體系。第七，英語自主學習策略的訓練不是浪費時間，而是為了更好地開展英語學習。
一、制訂學習目標和學習計劃
在教師的指導和幫助下，要求學生制定出近期的、具體的學習目標和相應的每周學習計劃。
近期的、具體的學習目標可以增強學生完成任務的信心，達到近期目標會給學習者帶來更多的滿足感和更強的自我效能感，增強堅持英語自主學習的信心。通過制訂每周學習計劃，管理自己的學習進程，學生增強了自主學習能力。要求學生每周寫下自己的學習目標并根據學習目標制訂具體的自主學習計劃（包括聽說讀寫四個方面）。每一天的學習活動都按照學習計劃進行。比如：學生可以計劃星期一練習VOA聽力30分鐘，在線閱讀Chinadaily英語新聞50分鐘；星期二用Skype和英語母語者對話20分鐘，閱讀700字，并根據閱讀內容寫出100字讀后感。每周利用教師安排的課堂時間和晚自習時間執行計劃。每一周開始時，學習計劃會由合作小組伙伴和教師檢查。學習目標和學習計劃的前后對比，系統地反映出學習者英語自主學習內容和程度的變化過程。根據筆者對實際教學過程中學生學習目標和學習計劃的整理和分析，學生初期制訂的學習目標往往“好高騖遠”、空洞而且難以實現。如學生馮源制訂的第二周學習計劃是“Enhance reading ability， and achieve the level 6 of IELTS”，這個目標遠大且實施起來無從下手，容易產生困惑。在教師的幫助和指導下，他將目標重新定為“Read 6 articles from IELTS reading materials sent out by teacher， and understand the new words ”。對于剛剛接觸到自主學習理念的學生來說，這個目標不僅清晰，實施起來難度也不大，更有利于學生根據此目標制定自主學習計劃，也能使他們因完成目標而產生更大的滿足感，激勵其進行下一步學習。如此每周一點一滴地推進學習進程，也讓學生明白了學習沒有捷徑，“積跬步才能至千里”。
二、填寫學習日志
每周制訂出學習目標和學習計劃后，要求學生在英語自主學習過程中做好記錄，填寫學習日志。學習日志要求學生認真詳細地記錄下每天學習的內容、時間和資源來源。每周自主學習結束后比照自己的學習日志與學習目標、學習計劃，看自己是否完成了既定目標，是否按照計劃進行學習。如果學習日志所體現出的學習進程和效果與計劃不符，就要尋找原因，修改下周的學習目標和計劃。逐步使自己的學習目標、學習計劃和學習進程一致，對自己的自主學習做到有效管理。學習日志同樣反映了學生自主學習的進程和自主程度，通過前后對比也可看出變化。
三、合作學習
美國明尼蘇達大學合作學習研究中心約翰兄弟（Johnson & Johnson，1994）的研究表明，合作學習對于學生的學習和發展具有明顯的促進作用。成功的自主學習經常需要學生的合作，不僅因為在自主學習進程中很多問題是學習者本身不能解決的，需要他人的幫助，而且有些學習任務也必須通過合作學習完成。具體做法有：
第一，根據測試成績和教師對學生的了解，學生以3至5人一組被分為若干小組（分為長期合作小組和針對某一學習任務的合作小組）。分組原則為：小組成員應各有特色，有男有女，英語學習能力有高有低。第二，教師可以圍繞一個話題給合作小組布置學習任務。第三，合作小組內部進行分工，收集資料，小組討論，完成各自分任務，然后匯總任務、討論。第四，得出任務成果。第五，自我評估和教師評估、補充。合作學習的過程比合作得出的成果更重要。合作過程不僅可以增強個體責任感，使學生學會自我評估和合作小組評估，實現資源共享，取長補短，使學習者更全面地認識事物，而且也可以通過這種相互依賴的學習形成相互的心理支撐，減少壓力，降低心理焦慮，使學生處于較佳的學習狀態。在合作學習的進程中，教師充當參與者、幫助者和評估者的角色，對小組學習過程中出現的困難給予必要幫助并對學習成果進行評估。另外，要根據小組的整體學習情況，獎賞成功的小組。
例如：英語聽力課堂上教師要求學生以合作小組的形式收聽有關2012年英國倫敦成功舉辦第30屆奧運會的英文報道資料，以演說的形式匯報收聽的內容、來源以及對收聽的新聞做簡單評價和總結。學生的反饋信息中，大多數學生喜歡合作學習，認為合作學習任務對他們來說比自己完成任務更輕松，也更加有動力。有些學生甚至可以給教師提出合理化建議。從學生的情況來看，合作學習受到學生認可和接受的主要原因有：第一，在合作學習中，與教師的幫助相比，更多的是來自于合作伙伴的支持和幫助，而合作伙伴的支持和幫助會增加學習的動力。第二，學習過程中會受到合作伙伴的鼓勵和贊揚，而那些“偷懶”的學生則會受到督促和批評。第三，合作伙伴的英語自主學習會對個體產生榜樣示范作用。合作小組中英語自主學習能力較強和英語學習成績較好的學生會在無形中成為學習榜樣。
參考文獻：
[1]徐錦芬.大學外語自主學習理論與實踐[M].北京：中國社會科學出版社，2007.
在做計劃的時候，首先要有些原則：
1. 計劃的時間不能定的太緊，否則有些意外就不能完成了。比如說，周一晚 8：00-10：00學習英語；10：00-11：00學習語文；11：00-11：30準備睡覺，不如改成8：00-9：30 學習英語，這樣如果有些內容到9：30沒有完成，可以延長15分鐘。
2. 為意外留出時間。每周的計劃要為意外留出時間。比如周二晚上學校占用了，需要安排出時間來補這一天的計劃。本來這個月的計劃已經做好，考試的時候又發現新的內容，更基礎的問題，需要時間補。這些都是需要預留時間的。
3. 每周留出總結的時間。檢查這個星期計劃完成的時間。不要想計劃做完了，就沒有我們的事情了。我們的工作中，不是也要計劃-執行-檢查嗎？
4. 計劃要具體。比如我們確定了這個月重點補習的科目是歷史，那么每周完成哪些部分，必須明確。不要讓學生花時間去想“今天晚上學什么”。
我們定的目標：
1. 做到一科，二科功課考前不用復習。要認識到，到了實際高考的時候，你是沒有時間去復習每一門功課的。堅持做到有一到兩門課程每次考試前不復習，如果每次考試成績都不錯，考生在高考的時候就會非常有信心。
2. 沒有特別弱的課程，也就是沒有落分的課程。
首先，我們把學生目前的水平做一個判斷，我暫且分了四檔：
1. 入門-不能夠完成老師作業的；
2. 初級-剛剛能夠完成老師作業的；
3. 中級-能夠完成老師作業的，有一定的自由時間；
4. 高級-大部分作業比較容易，多數難題能夠解決。
這里講的是學生總體水平，暫時不要和別的學校的學生比，只考慮你在本校的學習情況。
要把課程也分類：
1. 班里成績比較好的，能夠進入前十名的科目。這些科目考生比較有信心，學習起來也比較有興趣，也可以從完成作業的時間看。作業能較快做完的，也是學的比較好的。我們稱為a類課程。
2. 成績中等的，作業基本能夠完成。這些學科考生認為多花些時間就可以提高。我們稱為b類課程。
爭取獲得優良成績，能切實在大學里學到豐富的專業知識和基礎常識。增加文化素養，提升自身能力，端正學習態度，培養積極勤奮的學風。做學習計劃來自我敦促，自我勉勵。
二：具體安排
1. 堅持預習，堅持在上課前先預習一遍課文，在上課之前對所上的內容有所了解，能提高聽課效率。并且在老師上完一章的內容后，能夠主動復習。溫故而知新。
2. 每周抽一天時間早起背誦英語課文。
3. 每周堅持到校晚自習
4. 堅持去校圖書館借書閱書，堅持超額完成老師布置的讀書任務，并且做好讀書筆記。
5. 對于課程知識，要多想多問，并且把其中有收貨的部分記入筆記之中。
6. 每個月進行一次學習清算，反思自己這個月是否達成了學習計劃，有哪一些做得不足的地方，下個月要注意改進。
7. 訂閱英語輔導報，自學報紙上出現的一些英語單詞，并且完成報紙上的練習題。
8. 身為一個漢語言文學專業的學生，對于文字的敏感和寫作能力是非常重要的，所以應該堅持在平時多寫一些練筆。
二年內自學完成漢語言文學?？频娜空n程。
二、學習時間
1、預計每周學習7小時，平均每天1小時，根據情況略有調動。
2、快到期末時，復習2周，每周學習14小時，平均每天2小時。
3、在學習當中，我預計主要是利用紙質教材、網絡資源進行自學，如遇到問題主動與老師或同學交流。
三、學習內容
完成本專業設立的必修課、選修課和集中實踐課程。
四、學習形式
自學為主，在線學習為輔，遇到疑難問題及時上網查相關資料或與帶班老師溝通。
五、學習安排
首先全面了解所學的知識內容，視頻教學時，認真聽教師講解，充分利用電大網上課堂進行在線學習，把平時在太明白的疑難問題與老師和同學交流，提高自己的學習能力。在學習過程中利用有限的時間學習更多的知識。認真完成課后作業，做好課后復習及考試工作。
六、學習措施
1、每周保證計劃的學習時間。
2、制訂學習計劃時間表。
3、周六、周日協調利用更多的時間進行在線學習。
4、完成電大布置的作業。
七、學習原則
1、循序漸進原則。按照課程要求，由淺入深系統的進行學習。
實踐篇：“一日當家”培養自己的理財能力，體驗父母當家的感受。其次，跟同學商討成立“環保小分隊”，利用節假日賣報紙，積攢零花錢，捐助讀者林，保護母親河。在新學年里我要摒棄一些不良的習慣，全身心投入學習之中。
點評：實踐很重要，細節待完善
對小學生來說，制訂自己的學習計劃是養成好的學習習慣的基礎，吳子昕同學在保證常規學習的基礎上，能利用課余時間安排豐富多彩的實踐內容，既拓寬了自己的知識面，又提高了閱讀理解能力；“一日當家”可積累獨立生活的經驗，提高了自己的生存技能。另一方面，他開始對作為一個社會公民的責任進行實踐，像“捐助讀者林，保護母親河”的行動。在他的計劃中注重了知識的積累和習慣的培養，并融合了科學的方法，這是一則簡單、實效的學習計劃。
溫馨提示：長短計劃結合，留有自由時間
智力相同的兩個學生有沒有學習計劃，學習效果是不大相同的。合理利用時間，就要善于定計劃。制訂學習計劃要注意：
1、學習計劃要有個性。要根據自己的學習情況，生活習慣來制訂；計劃要全面。思想 、學習、身體是相互影響的。
一、領導重視、提前謀劃。開完區里的創建學習型機關的動員會以后，街道黨委立刻行動召開街道的動員會，成立了Xx街道創建學習型機關的領導小組，*任組長，同時按照區委創建學習型機關方案的要求，制訂了切實可行的《Xx街道創建學習型機關實施方案》。街道領導班子深刻認識到學習型機關對“和諧街道”建設的重要性，通過多次召開專題會議，對機關干部的學習活動提出明確要求，建立了“主要領導負總責，分管領導親自抓，班子人員配合抓，機關黨支部具體抓”的領導機制和工作機制，確保人員到位、責任到位、工作到位。街道班子特別注重學習理念的提升，堅持把學習擺到重要位置，與業務工作一同布置，一同檢查，一同落實。要求機關黨員干部要人人學習，時時學習，處處學習。黨員領導干部堅持帶頭參加各類學習，帶頭參加實踐活動，發揮表率和示范引領作用。在開展工作中我們重點做到了以下幾點：
一是領導示范引領。自開展此項活動以來，街道黨委領導班子在自覺學習的基礎上，結合分管工作，帶頭為機關干部、社區干部上黨課；黨政主要領導堅持在每周五政治學習課上結合當前重點工作和干部群眾的思想熱點作中心發言，班子其他領導輪流主持學習課程，結合分管工作做重點闡述，對促進干部加強學習，提高分析問題和解決問題的能力，起到了很好的引領作用，為更好的開展學習型機關起到了積極的推動作用。
二是營造學習氛圍，健全完善學習機制
（一）是嚴格學習計劃。街道黨委領導班子確立全街學習計劃，確保班子成員學習在前、領會在前、示范在前。機關黨支部定期制定干部學習計劃，確定學習重點，向大家提供學習材料；各科室也有針對性地制定相應的學習計劃，組織好本科室業務知識的學習；每位機關干部制定好個人的學習計劃。使每個部門和每個黨員干部學有目標、有方向、有動力。
（二）是建立和完善機關學習制度。將集中學、分散學和自學三者有機結合。街道首先將每周五下午確定為機關集中學習時間，通過采取授課學習、互相交流、觀摩電教片、匯報工作等形式，集中學習政治理論、方針政策、上級文件及機關日常工作注意事項；并根據街道工作中出現的新問題、新情況，及時調整、充實、豐富學習內容。許多同志課后都感慨地說：“學和不學大不一樣，思想通了，工作的勁頭更足了。”分散學習以科室業務知識為主，各科室通過確立學習計劃、要點，學習交流本科室工作。街道還實行了科室培訓新機關干部、社區干部的帶教制，幫助新機關干部、社區干部更快進入角色。個人自學以干部每天讀書學習半小時為重點，同時積極鼓勵和支持機關干部“八小時以外”的學習，這樣就保證了機關干部每周不少于7小時。
街道還利用信息化優勢，通過“Xx街道和諧博客”營造學習氛圍。建立機關干部《學習園地》，每個干部定期將自己的學習書籍、學習體會和調研文章在學習園地上，起到互相交流學習的目的。自開展學習活動以來，街道干部在《學習園地》上共發表各類學習體會20余篇。使學習成為機關一種經常性、制度性、自覺性的行為。
二、整合資源，豐富學習形式和內容。
一是多載體豐富學習形式。街道黨委采用“走出去、請進來”的方式，2010年，街道準備邀請區里領導、基層老黨員等專家對“學習實踐科學發展觀”、“雷鋒的生平事跡”進行學習，通過這些活動，為機關干部、社區干部深入領會黨的路線、方針政策、創造條件，不僅拓展了機關干部、社區干部學習的深度和廣度，更進一步提高了學習的效果。
街道黨委領導班子根據機關干部、社區干部的不同興趣愛好，適時組織各種活動和比賽，使創建學習型機關活動有張有弛，生動活潑。機關干部、社區干部在學習型團隊中持續學習，快樂工作，熱情參與，創造了內部和諧，發揮了人的智慧和創造力，樹立了新型的柔性管理理念，增添了單位的生機和活力。
2.加強運動，提高身體素質。
3.學會做簡單的家常菜。
二、暑假學習計劃具體方案：
1.針對自己的薄弱學科的學習態度、學習方法、學習目標進行反思，調整。
2.在家長的指導下，寫好自己切實可行的暑假生活、學習計劃。(安排好每天復習進度的明細內容)
3.把練習卷上做正確的題目進行整理，確認自己已經掌握了哪些知識，具備了哪些運用能力，樹立自己對本學科的信心最新中學生暑假學習計劃最新中學生暑假學習計劃。
4.把練習卷上做錯的題目進行整理、抄錄，打開教科書，逐題進行分析，找到錯誤的關鍵之處，進行認真的訂正后，再到教材上找到相關類型的題目，進行練習、強化。(盡可能用自己的力量解決問題)
5.遇到無法解決的困難，按教科書的學習順序進行梳理羅列。了解自己學習問題的共性薄弱點，然后可以請老師一起幫助解
6.每周二次帶著學科的不懂之處和老師一起分析、解決問題。回家后運用老師解決問題的方法進行自我強化練習，填補自己的學習漏洞。(這一點必須按照教材由淺入深的學習順序，切不可東一榔頭西一棒的無序)
7.每次完成習題的訂正，將錯題訂正的全過程，牢牢地記在腦海里(背出)，漸漸地形成解題方法的量的積累
