時間：2023-03-14 15:17:41
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在室內公共場所吸煙，就是犯法！
《公共場所衛生管理條例實施細則》規定，室內公共場所禁止吸煙！
吸煙有害健康
遠離煙草，崇尚健康，愛護環境
遠離煙草，拒吸第一支煙；凈化空氣，保護環境衛生
燃燒的是香煙，消耗的是生命。
無煙世界，清新一片。
小小一支煙，危害萬萬千。
健康，隨煙而逝；病痛，伴煙而生！
無煙的環境，健康的身體。
愛健康，全民禁煙大行動。
熄滅香煙，點燃文明。
健康隨煙而逝，病痛伴煙而生
現在吞云吐霧，以后病痛纏身
燃燒的是香煙，消耗的是生命
摒棄吸煙陋習，創造健康新時尚
還人類一片清新，請丟掉手中的香煙
第二組：公共場所禁煙標語
5月31日為世界無煙日，公共場所和工作場所禁止吸煙已成為時代潮流，吸煙是繼戰爭、饑餓和瘟疫之后，對人類生存的最大威脅。
1、小小一支煙，危害萬萬千。
2、健康，隨煙而逝；病痛，伴煙而生！
3、為了愛你和你愛的人，請不要吸煙。
4、現在吞云吐霧，以后病痛纏身。
5、 No smoking , No crying.
6、青煙長在，惡夢長隨。
7、 香煙是魔鬼的契約。
8、 提神不妨清茶；消愁不如朋友；若吸煙，又何苦？
9、我最怕最怕煙霧蒙蒙，看不清看不清你的面容。
10、 不一定煙霧繚繞的地方才是天堂。
11、健康隨煙而滅！有多少生命可以重來？
12、 無煙世界，清新一片。
13、吸煙，我們可以選擇，那么，生命呢？
14、還人類一片清新，請丟掉手中的香煙。
15、點燃香煙的一剎那，你也點燃了死亡的導火索。
16、 不抽一支煙，快樂似神仙！
17、讓你的肺清亮一點。
18、 煙緲緲兮肺心寒，尼古丁一進兮不復還。
19、 曾經有一堆煙擺在我面前，我沒好好珍惜，現在后悔莫及；如果上天，再給我一次機會，我會對那鬼東西吆一聲“get out”。
20、它（吸煙）是你最簡單的快樂，也讓你最徹底地哭泣。
21、都說吸煙的男人夠瀟灑，可知香煙的危害有多大？
22、 請把火柴留給你的生日蠟燭，而不是香煙。
23、蠟燭---燃燒自己，照亮別人；香煙---燃盡自我，貽害眾生。做蠟燭or吸煙？
24、燃燒的是香煙，消耗的是生命。
25、 It is easier to start than it is to stop.
Tobacco , it”s killing the one you love.
26、吸煙幾時止？美景幾時還？青春何能駐？生命何與共？只愿君能禁吸煙，盼回“無煙好世界”！
27、千山鳥飛絕，萬徑人蹤滅。吞云吐霧中，物物皆湮滅。
28、摒棄吸煙陋習，創造健康新時尚
哥倫布于1492年1月11日首度在美洲接觸煙草，然后引進到歐洲，逐漸傳遍全世界。
1996年，第49屆世界衛生大會在日內瓦舉行，大會發表了關于吸煙的第一份世界綜合性報告《警惕煙草》，報告指出： “香煙每10秒鐘殺害一個人，估計世界上每年有300萬人死于吸煙。倘若煙草消費量維持目前的增長率，那么到2010年前后每年死亡人數可能達到1000萬，其中70％的受害者在發展中國家”。
我國男性吸煙率雖整體下降，但仍然保持很高的水平，最近一次全國吸煙行為流行病學調查數據顯示，男性人群吸煙率為57%，吸煙行為幾乎沒有什么限制。這也是造成不吸煙者在多種場所接觸“二手煙”的主要原因。
2、現在吞云吐霧，以后病痛纏身。
3、你的香煙，我的石油，注定我們不能相愛——吸煙者禁入。
4、讓你的肺清亮一點。
5、珍惜生命，崇尚文明生活；熱愛生命，養成良好習慣。
6、遠離煙草，崇尚健康，愛護環境。
7、它（吸煙）是你最簡單的快樂，也讓你最徹底地哭泣。
8、摒棄吸煙陋習，創造健康新時尚。
9、吸煙，我們可以選擇，那么，生命呢？
10、千山鳥飛絕，萬徑人蹤滅。吞云吐霧中，物物皆湮滅。
11、煙緲緲兮肺心寒，尼古丁一進兮不復還。
12、不一定煙霧繚繞的地方才是天堂。
13、煙，盼回“無煙好世界”！
14、請不要讓你的自私點燃我的大樓——請勿吸因（商場禁煙）
15、想說愛你（吸煙）并不是很容易的事，那需要太大的勇氣。
16、點燃你的煙，污染了空氣，害了人性命，良心在哪里！
17、人，請不要吸煙。
18、點燃香煙的一剎那，你也點燃了死亡的導火索。
19、生命只有一次，怎能斷送在香煙上？
20、吸煙有害健康。
21、還人類一片清新，請丟掉手中的香煙。
22、拒絕煙草，珍愛生命。
23、為了你和家人的健康，請不要吸煙。
24、蠟燭---燃燒自己，照亮別人；香煙---燃盡自我，貽害眾生。做蠟燭or吸煙？
25、曾經有一堆煙擺在我面前，我沒好好珍惜，現在后悔莫及；如果上天，再給我一次機會，我會對那鬼東西吆一聲“getout”。
26、吸煙是繼戰爭、饑餓和瘟疫之后，對人類生存的最大威脅。
27、都說吸煙的男人夠瀟灑，可知香煙的危害有多大？
28、有時候相愛是一種無奈，有時候離開是另一種安排。為了愛你和你愛的。
29、無煙世界，清新一片。
30、健康隨煙而滅！有多少生命可以重來？
31、提神不妨清茶；消愁不如朋友；若吸煙，又何苦？
32、吸煙幾時止？美景幾時還？青春何能駐？生命何與共？只愿君能禁吸。
33、如果你想吸煙，定時炸彈在身邊?。佑驼窘麩煟?/p>
34、健康，隨煙而逝；病痛，伴煙而生！
35、一時的快樂，永恒的傷痛——請勿吸煙。
36、請把火柴留給你的生日蠟燭，而不是香煙。
37、小小一支煙，危害萬萬千。
38、遠離煙草，拒吸第一支煙；凈化空氣，保護環境衛生。
39、千萬別點著你的煙，它會讓你變為一縷青煙（加油站禁煙）
40、不抽一支煙，快樂似神仙！
盛年不重來，一日難再晨，及時當勉勵，歲月不待人。
把德性教給你們的孩子：使人幸福的是德性而非金錢，這是我的經驗之談，在患難中支持我的是道德，使我不曾自殺的，除了藝術以外也是道德。
一寸光陰一寸金，寸金難買寸光陰。
失去金錢的人損失甚少，失去健康的人損失極多，失去勇氣的人損失一切。
（來源：文章屋網 ）
ぶ型擠擲嗪:J 604
文獻標識碼:A
文章編號:1004-2072(2007)02-0055-03
おオ
聲樂藝術的獨特魅力不僅在于美妙聲音的展現，更在于真摯情感的抒發，聲樂演唱中的情感表現早已成為廣大聲樂理論工作者的重要課題，這方面的文獻十分豐富。但大多數的文章都是從作品的理解、情感基調、音高、節奏、音色、調式、調性、以及嗓音表現的感知等微觀的角度進行分析與闡釋，而忽略了重要的宏觀思考原則。鑒于此，本文擬從宏觀的視角，追溯聲樂藝術情感表現的歷史發展軌跡，扼要闡釋歌劇詠嘆調的戲劇性、藝術歌曲的文學性和民歌的民俗性。
一、聲樂藝術情感表現的歷史演進
ィㄒ唬┞蘊該欄枋貝聲樂表現
ト魏窩莩藝術都是隨著時展變化的，聲樂藝術也不例外，即人們對于音樂情感表現的認知和聲樂藝術的審美標準亦會隨之變化。 18世紀初至19世紀中是美歌(Bel canto)的黃金時代，不僅要求歌者以輕松、流暢的方法唱出均勻、響亮、圓潤、統一（無明顯的聲區轉換痕跡）的聲音，元音純正、吐字清晰，同時亦要求歌手具有非凡的技巧，寬廣而靈活的音域，各聲部都能即興演唱華彩樂段等。那時大量樂譜是手抄的，一般只提供一個簡單的旋律輪廓，這就要求歌手以各種裝飾，如滑音、跳音、抖音、波音及華彩樂句等來豐富它。這種即興的演唱被稱為"隨意唱"（Cantar al mente），歌手必須掌握具有獨創性的個人絕技和手段，在沒有音樂創作和樂隊效果或戲劇結構的幫助下，創造出激動人心的舞臺效果。
ピ諗分奚樂發展歷程中，美歌時代是聲音唯美、歌手高于一切的時代，人們并不認為作曲家或劇作家是演出成功的關鍵。正因為這樣，閹人歌手一度獨霸歌壇，他們的聲音既有男聲的力度，也有女聲的高度，能達至當時所認為的聲樂藝術的最高美感。 雖然也有少數女歌唱家登上歌劇舞臺試圖與閹人歌唱家分庭抗禮，如：苔希（V.Tesi 1700-1775）、彭蒂（B.Banti 1756-1806）、卡塔拉尼（A.Catalani 1780-1849）等，但她們在舞臺上演唱并無創新，仍是一味賣弄花腔而不顧歌曲的內涵和音樂情感的表現。這種唯美的聲樂藝術標準一直持續到以帕斯塔為代表的一批新型女歌唱家的出現才得以改變。
ィǘ）歌劇演唱轉變的代表
歐洲從19世紀20年代起，最典型的代表是帕斯塔（G.Pasta 1798-1865）。因她原本是戲劇演員，其聲音技巧并不完美，亦不完全符合當時要求的規范，嗓音的音色也不吸引人，但她以一種飽滿的熱情及扣人心弦的魅力征服了聽眾。最主要的原因就是她深刻地理解劇情，她一登場就以宣敘調進入角色，寓情于聲，全身心地以真實感情吸引聽眾，讓聽眾如臨其境。她把自己與所演角色融為一體，把歌唱與戲劇融為一體，使得19世紀30年代的歌劇演唱風格發生了劃時代的轉變。 女高音再不只是像小鳥一般發出婉轉的高音：唱著膚淺的花腔，在舞臺上好似牽線木偶般地游蕩，而是有著真實深沉、感人肺腑之聲的、氣度非凡的悲劇演員。帕斯塔的創新及她的特殊才能，為歐洲歌劇演唱戲劇化做出了巨大的貢獻。她的創造改變了多尼采蒂的藝術生涯與影響了貝里尼的創作風格。貝里尼的《夢游女》 、《諾瑪》等都是受到她特殊才能的啟發而創作的。
ビ紗絲芍，聲樂藝術的審美標準經歷了以歌手至上、聲音唯美到寓情于聲、聲情并茂的發展過程，從此，具有創新精神與真實的戲劇情感、能刻畫人物心靈的聲樂演唱，成為了歌劇音樂美學的標準。
二、不同類型聲樂情感表現的衡量標準
ィㄒ唬杈纈教鏡韉南肪縲
雖然，歌劇詠嘆調和藝術歌曲在音樂表現上都是音樂與歌詞的結合、人聲與器樂的結合，都是以舞臺藝術為表演形式的，但歌劇詠嘆調的音樂情感表現為戲劇角色的情感，除了帶有直接的"語義性"音樂表情外，其音樂情感的表現還直接或間接地來自于戲劇上的、特殊情感的造型創作--即詠嘆調音樂情感表現上的角色化、戲劇化的創作，是戲劇角色的獨唱曲，是對角色"具體情感"的特殊刻畫，其音樂情感不能脫離戲劇因素而獨立存在，因此它是客觀的戲劇化的聲樂現象。
例如，歌劇《托斯卡》中的選段"為藝術，為愛情"是托斯卡在假意答應警察署長時演唱的。一個善良的女伶在警察署長威逼利誘可又無力反抗下，心里充滿仇恨，但她深深地愛著她的情人，充滿對幸福生活的向往。演唱者只有體會了托斯卡愛恨交加的復雜情感后，把自己與所演角色融為一體，才能準確地塑造托斯卡熱愛生活、向往愛情的熱望以及 無力反抗、走投無路的悲傷與絕望
歌劇演唱要求體驗人物，以真實的戲劇性與音樂情感協調、統一的演唱，亦是歌劇美學的基本準則。
ィǘ）藝術歌曲的文學性
藝術歌曲文辭性較強、音樂的專業特點比較突出，其音樂情感表現與歌劇詠嘆調的情感表現不同，是聲樂、器樂和詩歌結合的統一體，帶有較強的文學性和器樂性。其情感表現在很大程度上來自于詩歌或詩人的情感，歌唱者的情感表現相對而言是比較獨立、自由、完整的。
ナ艿賾頡⑹貝、詩詞影響較大、音樂語義也較強的是19世紀浪漫主義音樂品種之一的德奧藝術歌曲。這些藝術歌曲的歌詞大都采用19世界著名浪漫主義詩人的抒情詩歌，為了表現出詩歌的意境、幽靜、細膩、浪漫等格調與深刻的寓意、深沉的情感，演唱時就要求充分運用聲樂技巧和音樂文學藝術修養， 例如運用輕聲、半聲和在高聲區上漸弱的表現手段等。這些藝術歌曲雖也運用美聲唱法，但演唱風格與演唱歌劇時迥然不同。它的演唱具有室內樂的特點，以抒情、敘事、吟誦為主，不像歌劇演唱要求戲劇性，或有大幅度的、強烈的音量變化與對比。
ノ了豐富音樂情感的表現，藝術歌曲在音樂情感表現上賦予聲樂形態與器樂形態以同等重要的地位。藝術歌曲的伴奏聲部起著獨立作用，旨在揭示旋律聲部沒有直接表現出的心理內容。因此，藝術歌曲的聲樂表現是立體式的，旋律聲部僅僅是立體詩意空間的一部分，這就要求歌唱者在演唱旋律時，除了保持聲樂情感表現中的文學價值與深刻內涵、掌握音色變化、吐字清晰之外，還必須保持著對器樂伴奏（鋼琴或其他）具有敏銳的感知力。例如，演唱舒伯特、舒曼等人的藝術歌曲，必須注意其伴奏的藝術表現力。除個別情況外，古典樂派藝術歌曲的伴奏僅是歌聲部分的和聲與節奏的烘托，而浪漫派作家的藝術歌曲卻給予鋼琴伴奏以音樂形象性及獨立的作用。這方面的先驅者舒伯特做出了杰出的貢獻，他使歌詞、旋律、伴奏三者結合，相輔相成，融為一體，意境完美。最典型的歌曲，如《魔王》（歌德詞），在148小節的貫穿發展過程中，從4個不同的人物（講述者，父親，病兒和魔鬼）的不同角度，用不同音色、心情和語氣，通過調性的對比轉換，織體，力度和音樂旋律線條的變化被生動地體現出來：魔鬼的誘惑，兒子的呼救與父親的緊張不安，講述者宣敘性的音調和鋼琴伴奏始終疾馳，并以三連音來描寫急迫的馬蹄聲，用低聲部描述黑松林中的寒風呼嘯聲，從定型化織體戛然而止及最后的和弦，與歌者共同營造出緊張陰森的意境和氣氛。フ饈資敉ㄌ謇嘈偷男鶚賂棖，充分體現舒伯特藝術歌曲其伴奏部分的音樂形象和獨立作用，當歌唱者演唱其藝術歌曲時對器樂伴奏（鋼琴）應認真理解、感知，必須深刻理解、細心衡量這些美感的尺度，歌唱的音樂美感表現才能全方位的符合藝術歌曲音樂美學的要求，從而能準確理解、規范和把握藝術歌曲音樂情感表現的尺度。
3.民歌的民俗性
ッ窀璧墓餐特點是：簡明精煉，質樸無華，曲詞順暢，有著濃郁的地方風格和可親的鄉土氣息，篇幅一般不大，但邏輯嚴密，能體現一個民族現實生活的價值。一個民族的民歌與該民族的地理環境、人文歷史、生活習俗等有很大關系，不同民族都有自己民族獨特的民俗性，因此，民間歌曲都有各自不同的聲樂表達方式和情感韻味的表現形式。同藝術歌曲相比，民歌的情感表現可以在一條樸素單一的音樂旋律上完美展現出來。
ダ如，我國的民族風格色彩是南方偏于柔美細膩，如江南民歌《茉莉花》，具有濃郁江南民歌韻味的歌曲，旋律流暢，優美抒情，清新雅致，表現了一位少女對生活的炙熱情感和少女的含蓄恬抒，頗有江南水鄉的詩情畫意般。而我國北方的民歌則較為剛健豪放。如《牧歌》展現在人們面前的是一幅遼闊壯麗的畫卷：藍藍的天空，一望無際的草原，白云下的無數羊群，表現了游牧民族熱愛生活、無拘無束的豪放情懷。
民歌的民俗性還體現在地方俗語在歌詞中的運用和演唱的方言色彩，取消了不同民族或地方語言的音調作用，也就取消了不同民族或地域聲樂藝術的不同風格與色彩的表現。例如《長沙山歌》，歌詞是："郎在那外間打山歌，姐在那房內織綾羅，我不曉得禾只個上屋，下屋，嶺前，坳背，巧娘，巧爺，生出咯樣聰明伶俐的崽喲，打出咯樣干干凈凈，索索利利，漂洋過海，鉆天入地的好山歌，打得那鯉魚子鉆不得水，打得黃牛子滾下坡，我綾羅子不織聽山歌。娘罵女你咯只死妖婆，你為何綾羅不織聽山歌，郎的山歌聽不得，他要打得你去把他做堂客。叫聲媽媽你莫罵我，你老年輕頭里也愛聽山歌，你不聽山歌又禾得有我，我不聽山歌又禾只有外孫伢子喊你做外婆。"歌詞中不少詞匯如"不曉得"，"禾只個"，"咯樣"，"崽"，"堂客"等字里行間浸透了長沙方言的韻味，是湘方言口頭語的鮮明表現，而拖腔拉音的旋律節奏正是湘民歌民俗性的體現。
ヒ隕媳收嘰雍旯鄣氖詠親匪萘松樂藝術情感表現的歷史發展軌跡，了解了聲樂藝術的審美標準從歌手至上、聲音唯美到寓情于聲、獨具特色聲情并茂的發展過程。同時，為了避免聲樂表演中的情感表現的一般化現象，重點闡釋了歌劇詠嘆調的戲劇性、藝術歌曲的文學性和民歌的民俗性，它們既是聲樂情感表現的衡量標準，也是聲樂藝術表演者成功與否的關鍵。
ピ鶉偽嗉:陳達波
ゲ慰嘉南祝
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Historical Development and Measurable Standardof Emotion Expression of Vocal Music
心理學家的研究發現：無聲語言所顯示的意義要比有聲語言多得多，而且更加深刻。對此，有這樣一個公式：信息的傳遞=7%言語+38%語音+55%表情。
所以，一名優秀的醫生，不僅要語言表達流暢，而且要精心設計自己的非語言體系，讓肢體語言自然、流暢、合理地表達出無聲的意涵，襯托出語言背后的無窮魅力。
肢體語言是給人的
第一印象
在某種特殊情況下，肢體語言不但可以單獨使用，甚至還可以表達出有聲語言難以表達的思想感情，直接代替自然有聲語言。
廣泛性：
與有聲語言配合默契
肢體語言的使用簡便快捷、靈活自由。只要人們張口說話，都會有意或無意地運用肢體語言來傳情達意，交流信息。
有時，肢體語言甚至先于自然有聲語言，在接受者的心目中形成第一視覺形象，直接影響自然有聲語言的表達效果;有時，說話人在不開口的情況下，單純運用肢體語言，也能傳達一定的信息。
有時候，患者在問醫生問題的時候，有的醫生頭都不抬，只是用一根手指，不耐煩地在臺板下壓著的文字上急促地點擊幾下――這樣的肢體語言，就是告訴患者：我忙著呢！你自己看！不是說過很多次了嗎？你怎么還不懂啊？
在醫生與患者的交談中，幾乎沒有只運用自然有聲語言而不運用肢體語言的。它總是與自然有聲語言配合默契，協調一致，相輔相成，相得益彰。
直觀性：
人體圖像更形象
有聲語言直接訴諸于人的聽覺器官，不具有視覺的形象可感性;而肢體語言則不同，它以靈活多變的表情、動作、體姿構成一定的人體圖像來表情達意，交流信息，直接訴諸于人的視覺器官，具有形象直觀的特點。
如形容物體的大小，用手勢來比劃，對某事物表示贊成或反對，采用點頭或搖頭的方式等，就具有鮮明的形象直觀性。
患者在問醫生具體關于病情的相關問題的時候，醫生可以借助肢體語言，讓問題的表達更加直觀、形象、生動，從而打消患者的顧慮。用手比劃一下，患者可以知道未來的創口究竟有多大。用手示意一下球體的大小，可以形象地傳達病灶的危險性，讓患者充分知情，而不要一味的猜測，惴惴不安。
對應性：
互動更協調
肢體語言不但要與有聲語言協調配合，而且交談雙方，要協調配合，雙向交流，才能達到交談的目的。
美國著名人類學家霍爾曾指出這種人類交際的常見現象：一個人傾聽別人說話時，總會望著對方的臉，尤其是他的眼睛;為了表示注意，聽話者會輕輕地點頭，或者說“嗯”、是的，如果哪句話他深表贊同，點頭就點得很深;如果感到懷疑，他就會揚起或皺起眉頭來，或者嘴角向下拉;要是不想再聽下去，就會將身子挪一挪，把腿伸一伸，或者移開視線，不再注視說話人等等。以上說的種種現象，正是對應性的表現。
所以，當患者在向醫生陳述病情的時候，醫生切忌頭都不抬，而是應該看著患者，并以同理心仔細呼應患者的表達。這既是對患者的尊重，也是很好的路徑去察覺患者的未發之音。尤其是通過面部表情，可以傳達對患者的認可、顧慮，以及疑惑、追問，從而更好地與患者交流。
依賴性：
與有聲語言相輔相成
肢體語言對有聲語言和具體言語環境的依存性，決定了它表意的多義性。離開了自然有聲語言，離開了一定的言語環境，肢體語言在當時特定的含義就不明確，就難于辨析和領會。
患者，在醫生面前，屬于絕對的弱勢群體。出于對疾病的恐懼和擔心，又囿于專業知識的缺乏，患者往往渴望醫生給予更多的關注、關懷和支持、鼓勵。有的醫生明明成竹在胸，但是，沉默不語，或者偶爾發聲，只言片語，那么，患者就會更加焦慮不堪。如果我們的醫生善于表達，充分告知，輔助于強有力的肢體語言，比如，有力的揮手、堅定的握拳、雙手自上而下的下壓……就會讓患者信心滿滿，精神大振。
肢體語言透露出的
秘密
醫生在與患者交談時，都會自覺或不自覺地用眼睛、面孔、身體和態度來表達自己的真正感覺，這就是肢體語言實現的過程。
握手是一種肢體語言
一個人的身體語言反映一個人的感覺，而恰到好處地用力握手對交談也至關重要。握手的方式，往往在不知不覺向別人透露不少你自身的秘密。
目光是一種肢體語言
握手，是肢體語言的一種，然而不管和對方是輕輕相握還是緊緊相握，眼睛卻決定著握手的性質。也就是說，目光更能表達出你交談的意圖。醫生和藹的目光，是醫者真摯心靈的自然投射，讓患者及其家屬充分地感到你的尊重、寬容和教養有素。
微笑是一種肢體語言
人們常贊美蒙娜麗莎的微笑，說她具有永恒的魅力。那么，她的魅力究竟在哪兒？蒙娜麗莎畢竟只是一張畫。她永遠不會開口，誰也不能知道她會說些啥。然而，她的微笑，她的眼神和表情卻一直在不停地“說話”。廣義而言，笑容都是美的、好的，因此即使一個天生嚴肅的人也可以通過訓練成為一個愛笑的人。
善用體姿語言
提升自我魅力
體姿語言，是利用人的身體姿勢變化來傳情迭意的肢體語言。體姿語言包括站姿、坐姿、步姿、蹲姿、臥姿等。這里我們主要分析一下站姿、坐姿的選擇，來提升醫生的專業權威性，獲得患者的認同。
說話時的站姿
站姿，是身軀站立起來說話的姿態。主要通過肩、腰、腿、腳等動作的變化來傳情達意。
如果站著和患者交流，醫生必須自信滿滿，體現出職業的權威性，不能過于放松、神情倦怠、甚至過于嘻哈、休閑、缺乏專業性。
通常的情況是：兩腿站直，胸部挺起，雙手自然下垂，雙目平視，表明精神振作，充滿自信。如果將雙手自然下垂，改成背后相交，就更顯得精神飽滿而有氣勢;兩腿略屈，兩腳稍微分開，身體重心不斷由這只腳移到另一只腳，胯骨放松，會顯得輕松自如，神態自若;兩腿分開，上身挺直，雙手叉腰，是極端自信的姿勢。
說話時的坐姿
更多的時候，尤其是門診醫生，是坐著和患者交流。
Abstract：Drug target discovery and verification is not only the first step of investigation of new drug， but also one of the most important factors in drug screening and directional synthesis. With the fast development of genomics， proteomics， bioinformatics and the advancement of new techniques， such as RNA interference and bacteriophage display， the discovery and verification of drug target is changing with every passing day. In the present paper， the development and successful cases of drug discovery and verification were reviewed.
Key words： Drug target;Target discovery;Target verification
藥物靶標是尋找藥物的基礎，在過去的幾個世紀中，人們很大程度上是依賴目前已知的五百多個藥物靶標來發現藥物?；蚪M研究表明，人類有3～4萬個基因和更多的蛋白質，其中許多蛋白質是控制人類疾病的潛在的藥物靶點，因此至少有 9/10 的藥物靶點蛋白尚未被發現。發現并驗證藥物新靶標對闡明疾病原因、藥物作用機制具有重要意義，是產生“重磅炸彈”式創新藥物的源頭。近年來，隨著基因組學、蛋白組學、生物信息學的快速發展，以及RNA干擾、噬菌體展示等新興技術的出現，新的藥物靶標搜尋和驗證方法不斷出現。因此，本文擬從基因水平、轉錄水平和蛋白水平，就藥物靶標發現和驗證技術的研究進展作一綜述。
1基因水平的藥物靶標發現和驗證
1.1從基因數據庫中搜尋藥物靶標20世紀90年代以來，表達序列標簽(expressed sequence tag，EST)數據庫被廣泛應用于新基因搜尋，如成功搜尋到了組織蛋白酶K 和阿立新受體等[1]。相對于EST 數據庫，人類基因組數據庫的序列信息更為完整，但它不能提供不同組織的表達信息，因此人們開始將EST 數據庫與基因序列數據庫結合起來搜索新的藥物靶標。2001年，3個不同研究小組分別應用不同方法，以H3 受體為參照，利用BLAST，FAST-PAN 和TFAST 程序，搜索到5 種新的H4 基因，這些基因都以標準分子生物學方法確認，可作為疾病治療候選藥物靶標。
1.2基因芯片技術基因芯片技術是在微小的基片表面集成了大量的分子識別探針，應用已知核酸序列作為探針與互補的靶核苷酸序列雜交，通過隨后的信號檢測進行定性與定量分析。基因芯片技術可以同時篩選、鑒別藥物或疾病相關基因，同時將這些基因與之功能聯系起來，因此在藥物靶標發現和驗證過程中是一個強有力的工具。但是由于芯片技術本身尚不十分成熟，在大量數據處理之后還需要大量的驗證工作;它反映的是mRNA 表達水平，而這未必與蛋白表達和功能一致，這使它在藥物靶標發現和驗證領域的應用受到一定限制。雖然如此，仍有許多成功應用的例子[2]。此外，基因芯片技術在阿爾茨海默病[3]、帕金森病[4]、惡性腫瘤[5]等疾病的藥物靶標研究中也發揮了很大作用。
1.3基因敲除技術基因敲除(gene knockout)是指對一個結構已知、而功能未知的基因，從分子水平上設計實驗，將該基因去除，或用其它序列相近的基因取代，然后從整體觀察實驗動物，推測相應基因的功能?；蚯贸Ｐ驮诎l現基因功能和藥物作用新靶點的發現方面具有高度價值，同時也有助于確定藥物作用于特定靶點后的不良反應。目前，研究者正在系統地敲除鼠固有基因，并根據哺乳動物生理學特點確定它們在體內的功能，這一研究足已覆蓋幾乎所有的蛋白質和可用于藥物研究的基因家族，如離子通道、核激素受體、蛋白酶、磷酸二酯酶、激酶、磷酸酶及其它關鍵的酶類。同時，基因敲除技術也已廣泛應用于確證藥物在免疫[6]、動脈粥樣硬化[7，8]、高血壓病[9]、糖尿病[10]和腫瘤[11]等疾病中的作用靶點。
2轉錄水平的藥物靶標發現和驗證
2.1反義寡核苷酸技術反義寡核苷酸技術是利用反義寡核苷酸或修飾的寡核苷酸與特定靶mRNA 的一部分互補，抑制mRNA 的翻譯和剪接，從而抑制其編碼的蛋白質的表達。與基因敲除技術相比，盡管這種方法是一種更加省時省力的研究目的基因的強大工具，但還是有局限性，如體內應用時生物利用度有限，毒性較大。利用反義技術驗證藥物靶標也有一些成功的例子。如Jarvis等[12]利用磷酸化的反義序列作用于P2X3 受體的1100～1119 和1166～1185 位點序列，證明P2X3 受體是慢性炎癥和神經痛的重要角色，據此為靶點發現了一種小分子A-317491。Okabe 等[13]利用cDNA 芯片技術分析臨床肝癌樣品發現，DDEFL1(development and differentiation enhancing factor-like 1)基因在肝癌組織中表達異常，進而以硫代反義核酸抑制此基因的表達，結果腫瘤細胞的生長受到抑制，提示DDEFL1 可以作為肝癌的潛在治療靶點。
2.2RNA干擾 (RNA interference， RNAi) 技術
2.2.1RNA干擾用于發現新藥靶RNA干擾技術自誕生以來，已被廣泛應用于藥物靶標的發現與確證，這主要是由于該技術具有很多其他技術所無法比擬的優點：能特異高效地抑制基因表達，獲得去基因功能表型;僅需要少量的核酸序列信號，而且不被蛋白結構影響;siRNA 的合成和控制較基因敲除或其他方法簡單易行、資金消耗少、周期短，使得我們能夠在短時間內大規模篩選靶點，而且可以通過質粒或病毒載體表達的小發卡RNA(small hairpin RNA， shRNA)干擾目的基因，從而達到了在細胞水平和動物水平篩選藥物靶標的目的[14， 15]。研究表明，RNAi 技術能快速有效地鑒別藥物新靶點，RNAi 文庫的應用將為腫瘤和感染性疾病等的發病機制和治療研究提供理論依據和新的切入點。
2.2.2RNA干擾輔助藥物靶點的確證高通量篩選技術可以發現和某種疾病相關的藥物靶點庫，然而要完全確定某蛋白在某種疾病中的重要性或某種蛋白在某種藥物發揮藥效中的作用，要看在動物模型內阻斷候選基因是否能減緩病癥或拮抗藥物原有的藥理活性，甚至在人體內驗證。鑒于近來向活體中轉染siRNA 技術的不斷提高，在動物模型中的應用也取得進展，于是利用RNAi 阻斷模擬人疾病狀態的動物模型中的基因的表達，對靶點進行深入的鑒定和評價呈現出潛在的優勢。Brummelkamp 等[16]通過逆轉錄病毒載體介導的shRNA 表達系統靶向K-rasV12 的mRNA，轉染人胰腺癌細胞，結果驗證了K-rasV12 是胰腺癌中一個很好的抗腫瘤藥物靶點，同時也說明RNAi 可以驗證藥物篩選中候選靶點在活體內的功能，為鑒定候選靶點最終是否能作為新藥靶提供了有力的證據。
3蛋白水平的藥物靶標
發現與驗證人類基因組計劃大規模測序為創新藥物的研究提供了前所未有的機遇，但是生命活動是通過DNA 到RNA 到蛋白質來實現的。藥物作用的基礎也是蛋白質而非 RNA/ DNA [17]。蛋白水平的藥物靶標研究具有更加重大的意義。迄今，已發現的大部分藥物靶標都是來自蛋白水平研究。蛋白水平藥物靶標的研究方法也是層出不窮，人們不僅通過蛋白質組學[18， 19]、蛋白芯片[20]、噬菌體展示[21， 22]等技術大規模篩選藥物靶標，而且還利用親和色譜[23～25]、酵母三雜交系統[26，27]、磁性納米探針技術[28]等發現了很多天然活性化合物或其衍生物的作用靶點。
3.1親和色譜技術在藥物靶標研究的漫長發展歷程中，親和色譜技術是最經典的一種技術。由于它具有能直接分離各種組織、細胞中的天然狀態蛋白、操作方便、穩定性強等優點，長期以來被廣泛應用于藥物靶蛋白的分離。迄今為止，親和色譜法已成功應用于FK506[23]、環孢菌素[24]等多種藥物靶蛋白的搜尋。常用的親和色譜法包括固相洗脫、藥物競爭法等，如果親和柱(柱材——藥物)與靶蛋白解離過慢，則很難洗脫下來，須制備無活性結構類似藥物的對照柱;如果藥物溶解性差，蛋白會隨不溶的藥物沉淀，則無效。2006-05報道的一種稱為“系列親和色譜法”的改良親和色譜法，則不受藥物溶解性、配基-蛋白復合物解離速度的影響，適合于溶解性較差的化合物，該方法已經甲氨喋呤、FK506 等藥物的靶點尋找上得到了驗證[25]。作者也采用系列親和色譜法首次發現了麥冬活性成分——魯斯可皂苷元的特異性結合蛋白(另文發表)。
3.2噬菌體展示技術噬菌體展示技術是一種有效的藥物靶點篩選工具，它可以將外源蛋白或多肽呈現在噬菌體表面，利用外源蛋白或多肽與待篩選藥物的特異性親和作用，通過吸附-洗脫-擴增的篩選富集過程，將表達與藥物特異性結合的外源蛋白或多肽的噬菌體大量富集，然后通過測序分析即可得到與藥物特異性結合的外源蛋白或多肽。這一技術將基因型和表型、分子結合活性和噬菌體的可擴增性巧妙的結合起來，是一種高效的篩選體系，同時也是一種探討受體和配體之間相互作用的結合位點、尋求高親合力結合配體的有力工具。據報道，Rodi[21]等利用噬菌體展示技術，對抗癌藥物紫杉醇進行篩選，獲得了紫杉醇在體內的藥物作用的靶點Bcl-2 蛋白。Jin[22]等利用噬菌體展示技術，通過固定化阿霉素篩選T7噬菌體人類肝臟的cDNA 文庫，得到了阿霉素的靶點蛋白hNopp140。
3.3三雜交系統三雜交系統(three-hybrid system)是近幾年在酵母雙雜交技術的基礎上發展的由活性小分子鑒定靶蛋白的方法。其基本原理與酵母雙雜交類似，只是在“鉤”與“魚”之間加了“餌”構成三雜交中的3個組分：其中的“餌”是一種修飾過的活性小分子，是由活性小分子和配體A 連接而成：“鉤”是由配體A 的受體蛋白與DB 融合而成;“魚”是由cDNA 庫中的蛋白融合在AD 上構成。當待篩選靶組織的cDNA 庫中的某一蛋白與小分子相互作用時報告基因的轉錄被啟動，這時細胞可被明顯檢測。Becker 等用周期素依賴性蛋白激酶(CDK)抑制劑作為餌，采用該方法從人cDNA 庫中篩選到多種CDK抑制劑的靶蛋白[26]。此外，在哺乳動物組織細胞中采用三雜交系統篩選活性小分子的靶蛋白也已獲得成功[27]。
3.4蛋白芯片技術蛋白質芯片是一種類似于基因芯片的高通量篩選方法。利用蛋白質芯片技術可以從正常細胞和病變細胞的蛋白質的變化中發現疾病相關蛋白，這些相關蛋白經研究篩選后可能成為藥物的新靶點。Fong 等[20]借助蛋白質芯片發現TROP2 將成為口腔鱗狀上皮細胞癌的診斷治療和抗口腔鱗狀上皮細胞癌藥物研究的新靶點。
4展望
雖然目前確定的藥物靶點還很少，藥物靶標的發現與驗證的各種方法也存在種種不足，毫無疑問人類基因組框架圖的繪制完成，功能基因組研究的深入，為發現更多藥物靶標提供了可能，這將有利于藥物發現和開發的進程。同時，生命科學與化學、物理學、信息學等其他學科進一步的交融，將為各種技術方法不斷發展完善奠定基礎。相信隨著功能基因組研究的深入及生物技術的快速發展，人類將能夠更加明確地闡明疾病的病理生理機制、藥物治療作用及其毒性作用的分子機制，發現更多可以治療疾病的藥物作用靶點或靶點組合，進而發現更好的藥物，提高人類的生活質量。
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Abstract： Chronic kidney disease(CKD), characterized by high incidence, poor health outcomes and high treatment costs, imposes a huge burden on individuals and society. Renal tubulointerstitial fibrosis and renal medulla hypoxia are believed to be the main causes of CKD progression. At present, ultrasound-guided renal biopsy is the gold standard for the evaluation and diagnosis of renal fibrosis. However, it is difficult to carry out follow-up monitoring in clinical practice because it is an invasive test with certain side effects and poor repeatability. MRI can provide information about tissue structure noninvasively, and advances in MRI functional imaging techniques offer promise for unique insights into renal function and fibrosis severity, but its potential to assess fibrosis and inflammation in diseased kidneys remains unclear. This paper reviews the research progress of functional magnetic resonance imagingin the diagnosis of chronic kidney disease.
Keyword： functional magnetic resonance imaging; chronic kidney disease; renal fibrosis;
慢性腎臟病目前已成為影響全球約10%人口的主要全球公共衛生問題，每年造成數百萬人死亡，并且數十萬人需要通過透析來維持生命[1]。因此，讓慢性腎病引起人們的足夠重視，并且做到早診斷，早治療，防止病情惡化，改善患者預后是非常必要的。
1 、慢性腎病的病理學基礎
大量研究表明，腎間質纖維化是多種腎臟疾病進展到慢性腎病的共同途徑和病理基礎[2,3]，在腎間質纖維化過程中，首先組織因受損啟動了腎臟纖維化，而纖維化會導致腎小管萎縮，毛細血管進行性減少，導致腎臟灌注減低[4,5]，導致血流減少和向腎臟實質的腎小管上皮細胞的氧氣輸送減少，又可以進一步促進纖維化[6]。因此，毛細血管丟失不僅是纖維化腎的關鍵特征，而且是與纖維化相關的進一步損傷的驅動因素[7,8]。隨著腎單位的瘢痕形成，沉積的細胞外基質會增加[9]，從而增加腎臟的僵硬度。
有研究表明，在腎間質纖維化形成的慢性進展過程中，患者早期可以沒有明顯的臨床表現，甚至在腎小球纖維化時，腎小球濾過率(glomerular filtration rate,GFR)仍可維持數年，直到腎小球間質纖維化的發展，最終導致GFR下降[10]，因此在腎小球纖維化發展為嚴重的腎損傷之前，早期發現纖維化并定量評價纖維化程度在理論上可以早期評估患者病情進展的風險，由于許多新的抗纖維化藥物正在開發中，這種早期的鑒定可能在患者發展為明顯的腎功能障礙之前，給予藥物干預，早期治療，有助于延緩腎纖維化的發生及發展[11]，改善患者預后，提高患者生存質量。
2 、慢性腎病診斷金標準
腎活檢是目前用組織學技術對腎纖維化進行特異性診斷和分期的金標準[12]，但因其具有創傷性，可重復性差，不適用于疾病進展或治療反應的長期監測，盡管近年來這種檢查技術變得更加安全，但并發癥和局限性依然存在。首先，腎臟穿刺活檢有出血的風險，嚴重者還可能會產生動靜脈瘺和腎周軟組織感染，甚至死亡[12,13]。其次，因為活檢樣本的直徑只有2 mm，即使是“滿意的”樣本也幾乎不包括髓質，因此腎活檢分析也必然受到抽樣偏差的影響[14]。
考慮到這些安全性和取樣問題，患者往往不愿接受活檢，當非侵入性檢測不能提供診斷時，臨床醫生往往得不到有助于臨床診療決策的關鍵信息。因此盡管活檢是目前評估腎纖維化的金標準，但從臨床和研究的角度來看，它都是不完善的。很顯然，安全、準確地評估全腎纖維化負擔的非侵入性新方法是必要的。
3 、慢性腎病的MRI研究進展
傳統的MRI通常無法實現組織纖維化成像，然而，結合對纖維化病理生理學的進一步理解，有學者使用釓對比劑增強MRI行心肌纖維化成像取得諸多成效[15,16]，這也為MRI纖維化成像提供了可能性，然而，由于釓對比劑對腎功能障礙患者的風險，這些技術不能適用于腎臟[17]。值得注意的是，隨著磁共振功能成像技術的進展，其他無釓技術也已被開發出來，例如擴散加權成像(diffusion-weighted imaging,DWI)、動脈自旋標記成像(arterial spin labeling,ASL)、磁共振彈性成像(magnetic resonance elastography,MRE)、血氧水平依賴性磁共振成像(blood oxygenation level-dependent MRI,BOLD-MRI)以及磁化轉移成像等，有望改善無創地檢測腎臟內結構、功能和分子變化的能力。有幾篇文章評論了這些無創MRI技術在腎臟中的應用[18,19,20]，包括Ebrahimi等[21]對腎臟功能MRI的精彩綜述，認識到微血管損傷和腎硬化對腎臟纖維化的重要性。
3.1、 擴散加權成像
DWI是一種能夠無創地探測到組織中自由水分子布朗運動的磁共振成像技術，通常用ADC來描述水分子的凈移動。腎間質纖維化的病理表現包括腎小管周圍微血管減少、細胞外間質中成纖維細胞的增殖以及基質沉淀，這些改變均有可能導致組織中水分子的擴散受限，從而減低ADC值。
在動物模型和人類中的大量研究表明，與健康腎臟相比，患病腎臟的ADC值顯著降低[22]。目前的證據表明DWI對腎間質變化特別敏感，例如腎纖維化、細胞(炎性或腫瘤性)浸潤和水腫[23]，腎纖維化核心活檢標本的纖維化百分率與ADC顯著相關[24]。近年來大量的研究顯示，CKD患者腎臟的ADC值與其腎纖維化量呈負相關[25]，并且隨著慢性腎病患者腎功能的降低，腎臟的ADC值也明顯下降[26,27]。
使用體素內不相干運動(intravoxel incoherent motion,IVIM)模型對擴散信號進行高級建模，分別估計擴散(ADC擴散)和灌注(ADC灌注)對總ADC值的貢獻[28,29]，這種能力可能會極大地提高對擴散機制的理解。Feng等[30]和Deng等[31]利用IVIM-DWI評估2型糖尿病患者的早期腎功能變化，發現IVIM參數值在檢測早期腎臟變化中比白蛋白/肌酐比值更敏感。Mao等[29,32]用IVIM-DWI對于腎臟功能和CKD病理學的無創評估可能是可行的，尤其是在早期發現腎功能不全時。
DWI的另一個延伸序列稱為擴散張量成像(diffusion t e n s o r i m a g i n g,DTI)，使用各向異性分數(f r a c t i o n a l anisotropy,FA)來測量沿不同軸線的水的流動性。因此，理論上使用擴散張量成像有利于捕捉到水在特定方向運動的有序結構的破壞，例如大腦中的軸突或腎臟中的小管。基于這種功能，DWI已被廣泛應用于神經成像，特別是缺血性腦損傷的早期檢測和腫瘤成像[33,34]。有關腎臟的研究顯示，由于腎小管結構的存在，使得腎髓質內各向異性程度比腎皮質更高；使用DTI，無論GFR是否降低，CKD患者腎皮質及髓質的FA值明顯低于健康對照組，對腎小球病變及腎小管損傷行進量化評分顯示，FA與損傷評分呈負相關[24,35]。
總之，DWI可能是所有類型CKD的首選成像技術，甚至在腎功能衰退之前，用于評估組織纖維化程度、預測功能演變和跟蹤治療過程中出現的微結構變化，這可以減少診斷和隨訪的腎活檢的數量[25]。為了提高DWI的特異性，將其與其他有前途的MRI (多參數MRI)相結合進行腎組織表征和隨訪，將有助于對正常和病變腎臟進行完整的形態學和功能評估。
3.2 、腎臟血氧水平依賴MRI
考慮到腎實質缺氧會引起一系列復雜的細胞因子和其他因素的激活，最終引起腎小管間質纖維化，導致腎功能進行性受損。利用這一現象，Ogawa等[36]用一種對血氧變化敏感的技術BOLD-MRI對腎臟進行成像，獲取圖像用來估計組織的含氧量，目前，BOLD-MRI已被廣泛驗證為腦氧合的一種測量方法[37]。Prasad等[38]首先在腎臟中進行了BOLD-MRI測試，結果顯示髓質的T2*信號低于皮質，這與髓質在近缺氧條件下工作的事實相符。另有研究[39]顯示糖尿病患者的腎皮質及髓質R2*信號均明顯高于正常對照組。髓質R2*信號與腎小球濾過率呈正相關，皮質R2*信號強度與e GFR呈負相關。髓質與皮質R2*值之比在糖尿病早期升高，隨著糖尿病腎病的加重而降低。Feng等[40]的研究表明髓質R2*值可能是一種新的更敏感的糖尿病腎病早期預測指標。同時，BOLD-MRI檢測到單純糖尿病期髓質缺氧，DTI未檢測到此期髓質定向擴散的變化，基于上述假設，筆者推測BOLD成像對早期腎功能改變的評估可能比DTI更敏感。
3.3 、動脈自旋標記成像
ASL通過磁標記動脈血液來測量組織灌注。由于腎臟較高的生理灌注，原則上腎臟是可以用磁共振動脈自旋標記技術進行灌注成像的理想臟器。ASL在動物[41]和人類[42]中的應用表明，與金標準的測量相比，該技術提供了合理的、可重復的腎皮質微血管血流估計。廣泛的研究表明，ASL對動脈狹窄或腎臟疾病的再循環是敏感的[43]。在CKD病人中，ASL顯示的微血管流速隨著e GFR不同程度減低而減低[44,45]?？紤]到腎纖維化與毛細血管損失和微血管灌注受損有關，CKD中可見的ASL反映的血流減少可能是衡量全腎纖維化負擔的替代指標，也可能預測進展風險。一項糖尿病腎病的研究顯示[46],ASL血流量的MRI可以無創測量腎皮質組織灌注的減少，且隨著病程的進展，組織灌注減少。
雖然腎臟ASL是一種具有腎間質纖維化的潛能，還有一些局限性需要解決。首先，測量結果受到低信噪比和相應的低分辨率的困擾，這限制了對皮質和髓質進行分別評估的能力，尤其是對皮質變薄的慢性損傷的腎臟。其次，ASL測量腎髓質灌注是困難的，因為髓質只接收總腎血流的10%，使得ASL信號通常比大腦皮層弱，那么要進行多次采集來改善信號測量，但這會延長掃描時間，使ASL對呼吸運動偽影更敏感。Nery等[47]應用背景抑制3D梯度自旋回波序列(a single-shot background-suppressed 3D gradient and spin-echo,3D-GRASE)可明顯改善ASL的運動偽影，使其可應用于患有重度腎病的兒童。
3.4、 磁共振彈性成像
腎纖維化的另外一個重要特征經常被忽視，那就是腎臟硬度的增加。器官硬化是由柔軟的腎實質細胞被剛性纖維基質所替代[48]，并通過這些基質膠原纖維的交聯進一步增強；這種器官硬化可以通過MRE來捕捉，得到組織剛度和感興趣區域彈性可視化的定量值[40]。Rouvière等[50]首次顯示了MRE在健康成年人中的可行性和可重復性。MRE已經是一種成熟的肝纖維化成像技術，已被證明可以準確反映活檢來源的肝纖維化測量結果[51],MRE用于腎臟的可行性已在國內外多項研究中得到證實。在一項動物研究中，MRE被用于檢測豬慢性腎動脈狹窄引起的髓質纖維化，研究結果表明隨著腎組織纖維化的增加，MRE測得髓質剛度值也明顯增加[52]。然而Brown等[46]對CKD患者腎臟MRE的一項研究顯示MRE的剛度會隨著CKD的惡化而降低，這很可能與較低的血液流速引起的組織膨大有關。
雖然這些初步研究結果令人鼓舞，但仍存在一些問題，與相對同質的肝臟不同，腎臟在結構上非常不均勻，因此，從活檢取樣點測量的硬度指標是否與活檢獲得的纖維化評分有更好的相關性需要進一步驗證。
3.5 、其他成像方法
過度的組織瘢痕形成或纖維化是導致終末期腎臟疾病的關鍵因素，磁化轉移成像(magnetization transfer-MRI,MT-MRI)利用附著在基質蛋白等大分子上的水質子(與自由水分子的質子相比)的不同磁性能，提供有關組織大分子組成的間接信息。Jiang等[20]應用該技術對進行的腎動脈狹窄手術的小鼠在基線及術后不同時段進行檢測，結果顯示，腎動脈狹窄的腎臟，磁化轉移率顯示從基線到術后6周逐漸增加(皮層和髓質分別增加13.7%和21.3%)，同時還伴有腎臟容量、灌注、血流量和氧合的逐漸減少，并且患側腎臟的磁化傳遞比圖顯示與離體標本測得的纖維化程度有良好的相關性；另外，該研究團隊進一步改進研究方案，在膠原體膜中選擇合適的MT參數，并將其應用于體內磁化轉移成像，研究結果證實了MTI在評估豬腎動脈狹窄性腎臟纖維化中的作用，研究顯示無論腎皮層還是髓質，在頻率為600 Hz和1000 Hz時的磁化轉移率均與天狼星紅染色法測定的腎間質纖維化呈良好的相關性[53]。
T1 mapping、T2 mapping：前面筆者闡述的腎纖維化的成像方法主要集中在MRI功能成像模式上，即圖像要么揭示腎臟的微血管灌注、氧合情況，要么就是腎臟硬化的改變，而目前，基于MRI的技術也在發展中，以檢查纖維化組織的其他特性。有一項動物實驗表明[54]，慢性腎病模型中腎纖維化程度與T1值呈良好的正相關性。
分子MRI也是檢測和評估器官病變的先進MRI工具。最近的一項研究取得了顯著進展。Sun等[43]使用彈性蛋白磁共振特異性顯像劑(elastin-specific magnetic resonance imaging agent,ESMA)進行無創性分析腎纖維化，彈性蛋白在健康的小鼠、大鼠和人的腎臟中幾乎不表達，而在進行性CKD的皮質、髓質和血管周圍區域中過表達；其次，在已經建立的纖維化模型給予伊馬替尼進行治療，發現治療后ESMA分子成像獲得的信號強度顯著低于對照組小鼠，說明彈性蛋白成像可以對腎纖維化進行重復和可重復的評估，從而準確記錄抗纖維化治療的效果。
4 、小結
間質纖維化是慢性腎損傷的主要原因，目前主要靠腎活檢組織學來對其評價，功能磁共振成像克服了活檢分析的創傷性和取樣偏差限制，為腎纖維化評估的無創成像提供了廣泛的可能性。以上筆者已經強調了幾種基于MRI的技術，它們可以展示腎臟纖維化的兩個重要病理特征：毛細血管減少和腎硬化，但每種方法仍需要進一步的發展和驗證。到目前為止，實驗數據顯示MR結果與腎纖維化和腎功能有良好的相關性，尤其是DWI可在一定程度上反映腎間質纖維化的程度，ASL及BOLD-MRI則與腎間質氧分壓則有很好的相關性；但是這些研究成果都處于基礎階段，還不能適用于臨床，這需要繼續發展和改進MRI腎臟成像方法來評估腎纖維化，早日將其轉化為臨床成果。
利益沖突：無。
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關鍵詞： 資金成本；目標成本法；改進
Key words： capital cost；target costing；improvement
中圖分類號：F275.3 文獻標識碼：A 文章編號：1006-4311（2013）11-0165-02
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作者簡介：許培（1993-），女，江蘇如皋人，在讀本科，江蘇科技大學經濟管理學院會計系，主要研究方向為財務成本管理。
0 引言
日本會計學會第53屆年會由“目標成本法特別委員會”發表了題為《目標成本法研究的課題》的報告草案。該報告將目標成本法活動視為綜合性利潤管理的一環，認為是企業確立中長期競爭優勢的、與產品開發相關聯的戰略性管理方法。理論界、實務界倡導的“目標成本法”，認為它具有強烈的管理工程學屬性，其獨特之處在于會計方法與工程技術的有機結合，可視為會計、工程與組織這三重力量的匯集。該報告作出的定義：“目標成本法是指，在產品的策劃、開發中，根據用戶需求設定相應的目標，希冀同時達成這些目標的綜合性利潤管理活動”。
這個定義有三點值得注意：①其目標是針對“用戶滿意”（Customer Satisfaction，簡稱CS）；②其手段是綜合性的，即工程方法、組織措施和會計計量融會一體貫徹實施的；③它以成本管理的形式達成終極的利潤管理的目的。顯然，這三方面對傳統成本管理學科有了不同程度的突破。鑒于“目標成本法”服務于改善成本信息這一目標，在工學數據匯總的基礎上必須針對各費用項目進行成本估算，并采用了具有管理會計屬性的成本控制方法（如將目標成本與估算成本對比的方法），也結合了并不隸屬于傳統管理會計的價值工程（Value Engineering）、設計評價（Design Review）等方法，這種結合可以視為成本管理學科的發展完善。
目標成本既是成本控制的目標，保證企業足夠好地完成生產、實現利潤。同時它還是針對某一產品是否投入生產進行決策的重要依據。本文認為現有理論與實務在闡述目標成本法時都沒有考慮資金成本這一因素，而這一因素可能影響產品的生產決策，即拒絕還是接受生產某產品。
1 目標成本法實施方法概述
目標成本法的實施方法表現為針對目標成本進行策劃并將其延伸至設計、制造階段。其實施流程粗略地可歸納為下面主要幾個階段：①產品策劃；②目標成本設定；③目標成本的功能別分解；④目標成本的部件別分解；⑤在設計圖紙上實施成本降低；⑥轉向實施生產的準備。
同時目標成本法還是一個成本管理系統，這個系統把市場需求融入到了產品的開發條件之中。企業以客戶愿意為產品支付的價款作為起點，用它扣除必要利潤來確定產品的目標成本，即允許成本。目標成本法之后的所有工作都集中在實現這一目標成本上。目標成本的基本規則是，只有那些生產成本小于或等于允許成本的產品允許被制造（Cooper和Slagmulder，1997年）。
2 傳統目標成本計算的基本模型
目標成本以市場調研為起點，以確定顧客期望的產品功能、質量和價格。企業根據市場的價格減去該公司生產產品的必要利潤所得到的結果安排生產。產品的市場價格和預期盈利之間的差異表示產品的允許成本或目標成本。一家公司制造的產品所必要利潤，通常是根據銷售回報率或利潤率標準（Cooper and Slagmulder， 1997； Sakurai，1989）來測量的。產品的目標成本確定后，企業就會委托一個專門的部門在其允許的成本約束條件下設計和開發產品，以滿足客戶的要求。
假設在整個生命周期內，產品的價格P、單位生產成本C，年銷售額Q和所得稅率t不變，傳統的目標成本法基本模型可以這樣來表示：NI=PQ（1-t）-CQ（1-t） （1）
滿足約束條件：NI/（1-t）≥αPQ （1-A）
NI是稅后凈收入，變量α是該公司的必要利潤率，為成本對象的凈利潤除以銷售額（Ingram和Albright，2007年）。
式（1）中的收益是根據稅后標準測算的，以此來與包含資本成本的目標成本法模型的后續分析進行比較。上式（1）右邊的第一項和第二項分別測算產品的預期稅后收入和生產費用。式（1-A）為其約束條件，表示的是企業保證產品生產所必須滿足的條件。
目標成本表示式子（1）中C的最大值。當滿足式（1-A）這個約束條件時，產品就能生產。因此，用式（1）的右側相應代替式（1-A）的左側那么就會得到C的最大值：
C=P（1-α） （2）
式（2）中，C表示產品的允許成本。實際上，C值是式（2）中產品的設計和生產團隊要努力實現的目標。一旦設計和生產團隊可以盡可能降低產品成本，同時又不影響客戶產品功能和質量的要求，那么就拿產品的估計成本與C相比。因此，由式（2）得來的C就是接受還是排除產品生產決策的基礎。
3 基于資金成本的目標成本計算模型
變量i是一個期間指標，i=1，2，…N，N是一個產品的經濟周期，Pi是期間i內產品的單位價格，Ci是期間i內單位生產成本，Ii期間i內長期資產的賬面價值，Qi是在期間i內生產和銷售產品的數量，ri是期間i內的資本成本，ti是在期間i內的所得稅率，α是該公司未來產品預期的必要利潤率，PVN，r是資本成本率為r的N年期年金現值，NPV是凈現值。
Hartman（2000年）和Shrieves、Wachowicz（2001）指出，產品的EVA貼現在數學上相當于其凈現值。因此，產品生命周期內的經濟收益，或凈現值，可表示為：
NPV=■■-■■（3）
式（3）中的第一項表示一個產品的稅后收入，第二項表示為取得營運收入而付出的資本成本。長期資產的初始投入，也就是I，乘以（N+1-i）/N表示每個期間長期資產提取折舊費用以后的資金占用。和前面一樣，假設產品的單位價格、單位生產成本、每年的產品銷售額、實際所得稅率以及資本成本，在產品的生命周期里都是不變的，那么式子（3）則可以簡化為：
NPV=■-I[1-■]（4）
滿足約束條件：NPV？叟0（4-A）
上式（4）右邊的第一項是產品經營收入的稅后現值，而第二項是投入資金在生命周期內資金成本的現值。式子（4-A）表示生產產品必須滿足的約束條件，即產品必須獲得等于或超過其資本成本的回報。實際上，和式子（1）、（1-A）一樣，式子（4）和（4-A）可用于實施目標成本法。兩個模型之間唯一的區別在于，基于式（4）和（4-A）的目標成本法，包含了資金成本的現值，即每期期初的EVA貼現。
更換每個期間的式（4），即相當于得出資本成本率為r的N期年金現值，即PVN，r。則式（4）可被改寫為：
NPV=（P-C）Q（1-t）PVN，r-I（1-PVN，r/N）（5）
滿足約束條件：NPV？叟0（5-A）
把式（5）的右邊的項代入式（5-A）的左邊，求得C的最大值：C=■（6）
式（6）中，C等于產品的目標成本。當一個產品的價格、年銷售收入、稅率以及資本成本隨產品的經濟周期變化時，式（3）可以用來確定產品的目標成本。
4 討論
在傳統的目標成本法模型下，產品的利潤率可能被夸大了，從而更有可能接受產品投產的決定。然而，當投入資金的機會成本納入到產品的成本時，產品的回報率可能會低于公司的資本成本率。因此，傳統的目標成本法模型可能導致管理層作出為公司生產無價值產品而不是有價值產品的決策。
目標成本法的一個缺陷是它在評估產品生產決策時沒有考慮到資本成本。EVA貼現模型代表了包含資本成本的目標成本法模型。傳統的目標成本法模型會接受負凈現值的產品，同時會排除正凈現值的產品。我們在做決策時，應比較公式（2）和公式（6）得出的成本數額，取兩者小的作為目標成本，然后進行成本分解、擠壓。這樣才能制定出充分可靠的生產決策。
參考文獻：
下面我們通過具體實例來分析考生在解答語言表達題時常易犯的錯誤。
一、審題不到位
例1.請以“夢想與現實”為內容，仿照下面的示例寫兩個句子。要求每個句子都采用比擬的修辭方法，兩個句子之間構成對偶。
太陽熱烈、奔放，帶著萬丈光芒，給生靈以活力；
月亮溫馨、寬容，帶著無際清輝，給萬物以安寧。
[解析]
答本題，有幾個注意點：（1）明確所寫內容；（2）每個句子都用比擬修辭；（3）句子之間構成對偶形式。但有些考生誤答成“大海與森林”“山峰與河流”“教師與父母”“山與水”“辣椒與薄荷”等等，沒有“以‘夢想與現實’為內容”。這樣的回答，只能得0分。
原試卷未提供答案，筆者試擬：夢想輕盈、綺麗，猶如一顆流星，劃亮整個夜空；現實沉穩、樸實，猶如步步臺階，踏遍人生旅程。
例2.一位學者指出，“”是一個早已普遍使用的漢字，它形簡而意賅，直觀而獨特，但許多重要的漢語辭書卻沒有收錄。請用一個生動形象的句子表達讓“”字盡快收錄到漢語辭書中這樣的意思。
要求：（1）切合原意；（2）運用比喻或比擬的修辭方法。
[解析]
此題考查按照具體要求正確運用常見的修辭方法的能力。值得注意的是，試題不是要考生講道理、作議論，自行寫出一個將“”收進辭書的“理由”，而是要求表達“讓‘’字盡快收錄到漢語辭書中”這樣一個意思――許多考生卻都誤讀了題意。
答案示例：（1）不要讓“”字到處漂泊，讓它有“籍”可入，有“家”可歸。（2）“”字睜著圓圓的大眼睛，期盼著回到母親的懷抱。（3）“”字睜著圓圓的大眼睛，盼望回到自己的家園。（4）無家可歸的“”字，盼望和自己的兄弟姐妹們一起生活。
例3.請用“月光如水水如天”為統率句，寫一段情景交融的文字。要求想象合理，語言連貫，不少于80字。
[解析]
回答本題，除注意“想象合理，語言連貫，不少于80字”外，還有兩個隱性要求須遵守：（1）“用‘月光如水水如天’為統率句”，意味著“月光如水水如天”應置于語段開頭；（2）既然是“月光如水水如天”，內容上就要先寫“月光如水”，再寫“水如天”，既不能有所遺漏，又得講究順序。
答案示例：“月光如水水如天。”放眼望去，但見清冷如水的月光，傾瀉在波光粼粼的江面上，月光就像熠熠閃動的江水，江水又仿佛和幽深的藍天連成一片，整個世界好像都融化在無邊的迷茫、恬靜的月色水光之中。一個多么清涼、寂靜的夜晚啊！詩人不禁觸景生情，感到寂寞悵惘。
二、內容不合理、格調欠高雅或色彩不協調
例4.請參照下面材料中畫線的部分，另選我國兩個傳統節日（如春節、清明節、端午節、重陽節等），仿寫句子。要求字數相同，句式相似。
黃土黃，那是江北世世代代淳樸的厚實；清水清，那是江南祖祖輩輩悠然的淡雅，蕩漾著千年的風物與風華。唯在中秋，江南江北，共賞一輪明月；或在元宵，將一鍋鍋湯圓，煮成千年不變的甜甜蜜蜜與團團圓圓。
[解析]
有考生的答案是：“唯在端午，江南江北，同敬一位詩人；或在清明，將一張張白紙，折成百年依舊的悲悲戚戚與凄凄慘慘?！比绱嘶卮?，感彩與原句喜慶的基調不符，得分自然就不會高。
【答題指津】
一、壓縮語段
（1）根據閱讀材料的性質，明確其側重點。記敘性材料中，時間、地點、人物、事件等是重要信息；議論性材料，關鍵是找到論點句；說明性材料中，對象、范圍、特征是主體內容；新聞材料，要抓住“導語”不放松。（2）分析閱讀材料的結構，弄清其內在關系。（3）對文段殊的句子（如中心句、首尾句、過渡句、設問句）和詞語（如“首先”“其次”等）要高度重視。（4）扣住題目要求，盡量用主謂句（尤其是主動句）表達；盡可能選用材料中負載主要信息的原詞；嚴格控制字數，使用單音節詞、簡稱、代詞等。（5）最后來個“回頭望”，檢查所概括的信息要點全不全、語句連貫不連貫等。
二、仿用句式
（1）弄清題目要求。有時題目規定陳述對象，這時須以給定的對象為主語。（2）弄清原句中心，理解原句的隱含意義，在讀懂文意的基礎上把握主旨，循旨聯想，遵旨選材，按旨索句。（3）注意句子結構形式的高度一致。（4）分析所給例句所用的修辭格。（5）仿寫的句子同例句相比，色彩要和諧（如詞語的褒貶雅俗，感情的憂傷、喜悅、沉重、明快等）。此外，仿句立意境界要高，最好有一定的意趣。（6）對聯是一種更為嚴格的仿寫。對聯的基本要求：上下聯字數相等，詞性相同；內容關聯而不重復；仄起平落（上聯末字是仄聲，下聯末字是平聲）。
三、變換句式
（1）審清要求，明確答題的方向。（2）分析原句特點，包括原句的句式特點、各分句間的關系等。（3）根據題目要求改變句式，同時須相應地改變原句中的詞語甚至句子結構。比如主動句與被動句的變換，要將主動者與被動者的位置互換，表主動和被動關系的介詞“把”“被”等也要改換；再如長句變短句，最基本的就是使長句的附加成分“消腫”，方法有三：一是把長句的附加成分獨立出來，單獨成句；二是利用復指的辦法，使句子主干突出；三是重新組句。變換時可添加必要的句子成分或關聯詞語，有時還要重復某些詞語或添加代詞。
四、語言簡明
（1）掌握消除歧義的方法：一是更換詞語，把容易產生歧義的詞語換成意義單一的詞語；二是增設語境，給歧義句增設上下文；三是調語序，把句內有關詞語的位置改動一下；四是改動標點；五是重新造句。（2）掌握避免冗余的方法：一是找主干，理枝葉，發現并消除贅余的詞語；二是分析句間關系，發現和刪除重復的語句；三是把握語段主旨，發現和刪除游離于中心之外的內容；四是恰當地運用省略和指代；五是恰當地對某些內容進行概括與合并。
五、語言得體
語言得體涉及以下幾點。（1）要考慮一些特殊用語的含義和用法，如謙稱和敬稱、自稱和他稱、褒義和貶義、口語與書面語等。以敬稱來說，常見的有：看望別人說“拜訪”，陪伴朋友說“奉陪”，中途退席說“失陪”，求人幫忙說“勞駕”，請人指點說“賜教”，贊人見解說“高見”，等等。（2）要考慮說話人（或聽話人）的身份地位、職業經歷、性格修養、表達目的以及心理因素與文化修養等。（3）要根據外部環境――場合、時間、氣氛等考慮詞句的選用。
六、擬寫公益廣告
【中圖分類號】Q94-34 【文獻標識碼】A 【文章編號】1009-9646(2008)08-0191-02
植物標本是與植物相關的教學中不可缺少的直觀教具,它能幫助學生了解植物形態特征,增強記憶,并可克服課時進度與季節脫節而導致選材的困難,便于學生觀察和學習,增加教學效果。另外,植物標本也是科研工作的重要資源,還是保護植物種質、鑒定植物種屬的重要依據。
1 植物標本的干態保色保存
1.1 常規保色保存
常規保存的標本也叫臘葉標本。蠟葉標本的傳統制作方法是將采集來的植物標本經整理后,平放在標本夾的吸水紙上,壓制吸水幾天而成。臘葉標本在制作過程中應根據植物的不同特點,進行特殊處理,使其達到最佳效果[1]。王艷秋等對肉質、易掉葉植物和易變黑植物標本的壓制方法進行了研究,結果表明通過把植物材料均勻放在吸水紙上,每天翻一次標本和每天翻二次標本進行觀察研究,發現含水量較低的植物,經8天8次的處理,成品率較高;但對含水量較高、花瓣較大的肉質植物則需要經8天16次的處理,其成品率常低于前者[2]。因而在處理標本時,既要考慮到植物材料的差異,又要考慮到處理時所采用的方法、時間的長短及環境因素等,不同類型采用不同的處理,使標本盡量保持它的本色,以達到最佳效果。
1.2 烘干保色保存
用烘箱干燥標本,也有很好的效果,一般溫度在30℃～50℃[3],黃艷花等把夾好的標木夾放入40～50℃的干燥箱中烘干,效果較好[4]?；蛘哂眉t外燈烘干壓制,也就是用瓦楞紙板、泡沫板把夾著標本的草紙隔開,用標本夾捆住,放于烘烤架上(金屬材料),紅外燈放于烘烤架下進行烘烤,溫度為40℃左右[5]。用紅外燈烘干壓制不但保持標本的原有色彩,而且還可殺死標本上的一些蟲卵和病菌,值得推廣應用。王蘭州等依據風、熱能夠加速水分蒸發的原理,首次研制出了一種便于攜帶、又能省時省力地對新鮮植物標本進行快速、優質干燥的機電一體化設備,命名為“便捷式植物標本干燥器”,這種設備使植物標本壓制時能夠省時省力、優質而又便于攜帶[6]。
1.3 熱熨保色保存
就是將整形后的花、葉放在兩層吸水紙的中間 ,鋪于平板上,以預熱的熨斗或裝有熱水的搪瓷杯來回熨3～4次,標本驟然失水,色素未破壞。倘標本較厚實,失水不足,可換吸水紙再熨,然后再把熨好的標本整理、固定、上蠟,貼上標簽[7]。對于在一般的干燥條件下花會褪色的植物也可用熱熨保色保存,把采集到的植物先放在標本夾中1～2天,然后在紙的上面用熾熱的烙鐵熨燙,這樣干燥的花,顏色便能保存很好[3]。對于含水量較高易變色、霉變的植物標本,舒孝喜采用電熨斗隔著吸水紙小心熨燙(注意溫度不易過高),使其快速脫水,來保持植物的原有鮮艷的色彩[8]。
1.4 硅膠干燥保存
將事先烘干的硅膠顆粒(1～1.5毫米)慢慢倒入盛放標本的盒子或標本瓶中使其充滿標本的每個空隙,直到完全覆蓋為止,然后將標本放入干燥箱中5～6天,硅膠作為干燥劑吸去標本中的水,如有真空干燥器將標本置于其中抽氣并保持低壓二天左右也可完成脫水過程[9]。陳尚義將采集的植物標本放在夾有草紙干燥過的硅膠粉的標本夾中捆緊,放入烘干箱(通電后高溫中)迅速烘干的方法也成功的進行了標本的保存[10]。
1.5 微波干燥保存
將按常規方法整理好的標木夾放入微波爐內的轉盤上,將微波爐門關閉,根據植物體含水量,來確定處理功率和時間[11]。劉淑琴將采集到的植物標本在形態和顏色沒有改變之前置于微波爐中,通電幾秒鐘就完成了干燥過程[9]。
2 植物標本的浸制保色保存
因干態保存的標本未經過原色的固定,所以保色的時間較短,保色的效果往往不是很好,科技工作者做了大量的實驗,發現通過對采集的植物進行化學處理,使原色固定,然后進行浸制保存,可使制作的標本色澤自然、形態逼真,能較長時間保持原色澤不變。
2.1 綠色植物標本的浸制保色保存
植物體之所以呈綠色是因為植物體的葉綠體中含有葉綠素,葉綠素是一種復雜的有機化合物,其分了結構的中央有一個金屬鎂原了,葉綠素呈現綠色的原因就是由于含有鎂原了的核心結構。葉綠素極容易分解破壞,且易溶解在酒精或福爾馬林等保存液中,所以浸在酒精或福爾馬林等保存液中的標本以及干制的臘葉標本如果不進行保色處理,很容易褪色,當葉綠素與酸發生反應時,鎂就分離出來,此時因葉綠素缺鎂,所以植物就變成褐色,這種沒有鎂的葉綠素一般稱為植物黑素。與此同時如果把另一種金屬銅原了放入黑素分子中,使葉綠素分了中的核心結構恢復原來的有機金屬化合狀態,植物體便獲得了象葉綠素樣的綠色物質,而重變綠。以銅原子為核心的葉綠素分子結構很穩定,不容易分解破壞,且不溶于酒精或福爾馬林中,所以經過如此處理的植物標本在保存液中可以保存綠色。
韓峻等將醋酸銅結晶加入50%冰醋酸溶液中,直加到溶液飽和為止,然后用4倍水稀釋,再加熱至80～85℃,把要做成標本的植物放進燒熱的溶液中,繼續加熱,直到植物由綠變褐,再由褐轉綠時,把植物取出用清水洗凈,保存于5%福爾馬林中,進行綠色標本的保存[12,13]。宋良科等對藥用植物原色標本的制作進行了研究,結果發現將清洗且晾干的材料標本用7%CuS04硫酸銅溶液固定2～4 d,取出洗凈,(根據標本的老嫩程度確定,老的時間長些,嫩的短些),再用0.2%亞硫酸溶液保存于標本瓶中,密閉瓶蓋的方法,無論從效果、操作和經濟適用上均較好[14]。劉淑琴將硫酸銅[CuSO4?5H2O]制成飽和溶液按比例將100份飽和溶液跟67份甲醛,333份水混合得到處理液,然后將綠色標本放入處理液中浸泡20天后取出,用清水洗凈后浸入4%甲醛溶液中長期密封保存,其保色效果也很好[9]。
對不適于熱煮或藥液不容易透入的植物,可以改用硫酸銅飽和水溶液700m1、福爾馬林50m1、水250m1的混合液,將植物放入這種液體中浸漬,浸漬時間的長短,要視植物老嫩程度和種類而定,當植物褪成黃色而又重新變成綠色時,即可取出,用清水將藥液洗凈,然后放到5%福爾馬林中保存,標本就制成了[12]。對于葉薄而嫩的植物因其在高溫下易變軟,可將50%乙醇90ml、福爾馬林5ml、甘油2.5ml、冰醋酸2.5ml、氯化銅10g配成混合溶液,將標本浸漬數日,即可保色[15,16]。
2.2 紅色植物標本的浸制保色保存
某些器官呈現紅色是由其細胞里的花青素決定的,而花青素具有遇堿性溶液易變蘭、遇酸性溶液變紅的特性。因此,采用合理的酸性溶液來加以處理即可達到使植物保持紅色的目的。
寧小清實驗發現用硼酸45g,95%酒精200ml,40%福爾馬林200ml,加蒸餾水至1000ml,將植株置于其中浸制且保存,這種方法對澳洲合歡花、辣椒果、荔枝果的紅色保存效果較好[17]。韓 峻用硼酸粉450g、水2000~4000m1、75～95%酒精2000m1,福爾馬林原液300m1混合起來,取澄清液作為浸制液,直接用來保存標本。如果保存粉紅色的標本時,須將福爾馬林減至微量或不加[12]。劉淑琴等研究發現將硼酸3克,40%的甲醛4毫升與水400毫升混合制成固定液,然后將洗干凈的紅色植物標本放在固定液中浸泡1-3天,如不發生混濁現象即可取出放入由甲醛25毫升、甘油25毫升、水1000毫升制成的保存液或由10%亞硫酸20毫升、硼酸10克、水580毫升制成的保存液中長期密封保存,對較大的果實標本最好用注射器注入少量保存液再長期密封保存效果會更好[9][18]。
2.3 黃色或黃綠色植物的浸制保色保存
黃色的花和果實主要是其中含有類胡蘿卜素和核黃素,類胡蘿卜素和核黃素又是由胡蘿卜素和葉黃素組成,胡蘿卜素為橙紅色而葉黃素為黃色。用化學方法保持其結構從而保存其顏色。
取6%亞硫酸500毫升和80~90%酒精500毫升加入400毫升蒸餾水混合得保存液,將采集來的標本直接浸入保存液密封保存效果較好[9]。寧小清用亞硫酸50ml,95%酒精50ml,加蒸餾水至1000ml,將植株置于其中浸制且保存,效果較理想[17]。韓 峻用亞硫酸飽和溶液568ml、95%酒精568ml、水4500 ml混合起來取澄清液對標本進行了保存[12]。
2.4 黑色、紅紫色、紫色標本的浸制保色保存
對黑色、紅紫色、紫色標本的浸制保色保存,一種方法是用福爾馬林450ml,95%酒精540ml、水18100ml混合起來,取澄清液來保存標本。另一種方法是用福爾馬林500ml、飽和氯化鈉溶液1000ml、水8700ml混合液的澄清液,來保存標本[12]。
3 植物標本保存的新方法
因干態標本在使用和保存過程中易氧化變色、易腐蝕、被蟲咬,標本的莖、葉容易折斷,花果實等也易脫落,且使用不方便。而浸制的標本由于保存液揮發后減少,需經常添加保存液,保存液揮發的氣味也使室內空氣有難聞的甲醛污染,影響工作人員的健康,也不利于參觀學習。隨著社會的發展和科技人員的研究,目前所使用的新的植物標本保存方法有以下幾種:
3.1 塑化法
唐安科把原有的浸制和新鮮的植物標本經過加工處理,即先給綠色植物保色,再用水溶性塑料聚乙二醇(PEG)處理來替換植物內的水,制成了高分子水溶性塑料處理的標本,這種標本不需加入甲醛、乙醇等防腐劑浸泡,就能防霉防蟲,有一定的實用價值[19]。
3.2 塑封法
把制成的干態標本或化學保色后的浸制標本制干后,用塑封膜塑封,這種方法保存的標本保色期長、使用方便(可用實物投影儀在課堂上展示)克服了用掛圖的死板,同時彌補了新鮮標本容易損壞及課時進度與季節脫節而導致選材困難等不足,用塑封法還可制作葉形、葉脈及其剪貼標本等,不僅容易保存而且使用方便、效果明顯,且具有一定的藝術性和觀賞價值[11][12][20]。
3.3 電子標本保存法
隨著科學技術的發展和數碼相機的普及,電子標本越來越引起重視,它克服了傳統標本的局限性,比如傳統標本在植物標本的采集、制作時成本高,需要時間長,許多植物種類的標本很難采到,標本使用過程中破損和廢棄嚴重,保存需要很大的標本室空間和專門人員的管理等等,而植物電子標本具有圖片清晰、易拷貝、不占室內空間、易管理等優點,它的電子圖片也可用于多媒體教學,為傳統課程實現電子化和網絡化教學奠定了基礎[21]。
4 標本制作中有待注意的問題
雖然絕大多數植物按物理和化學方法都能解決好保色問題,但也有一些植物保色效果不理想,如桂花樹、松科的植物等基本上還沒有找到理想保色方法;葉中含有膠汁的一類植物如橡膠樹、印度榕、桕等,保色后,葉子顏色容易發黑;而女貞、黃檀等植物在保色過程中不僅顏色不綠,而且葉子容易脫落;還有馬齒莧保色后,標本呈現紫紅色等問題均有待進一步研究[16]。另外,電子標本不能完全代替傳統的蠟葉標本和液浸標本,因為在許多方面,實體標本仍具有其獨特的作用,比如植物新的形態變異或新種類、新類型的比較鑒定,從標本中提取樣品,不同產地標本形態的變化,生物多樣性研究等方面,傳統標本的優勢是電子標本所不能替代的[21]。
參考文獻
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關鍵詞：巢蛋白陽性細胞 胰腺 表達
關鍵詞：巢蛋白陽性細胞 胰腺 表達
早在1985年Hockfield 和Mckay首先發現巢蛋白在胚胎大鼠脊髓神經管神經前體細胞表達，將其稱為神經上皮干細胞蛋白。以后發現巢蛋白存在于胚胎期的膠質細胞、成年的神經前體細胞等細胞中。Hunziker等[1]發現在胰腺內有巢蛋白陽性細胞（nestin+）。Lumelsky等[2]認為巢蛋白可以作為多潛能的胰腺干細胞的標志。體外分離克隆胰腺干細胞作為種子細胞，并定向誘導其分化為功能性胰島移植治療糖尿病，是解決胰島供體短缺的有效途徑。因此檢測胰腺中的nestin+并對其進行分離、體外增殖、誘導分化及克隆成為人們研究的熱點之一。本文綜述巢蛋白在胰腺中的表達及相關研究進展。
早在1985年Hockfield 和Mckay首先發現巢蛋白在胚胎大鼠脊髓神經管神經前體細胞表達，將其稱為神經上皮干細胞蛋白。以后發現巢蛋白存在于胚胎期的膠質細胞、成年的神經前體細胞等細胞中。Hunziker等[1]發現在胰腺內有巢蛋白陽性細胞（nestin+）。Lumelsky等[2]認為巢蛋白可以作為多潛能的胰腺干細胞的標志。體外分離克隆胰腺干細胞作為種子細胞，并定向誘導其分化為功能性胰島移植治療糖尿病，是解決胰島供體短缺的有效途徑。因此檢測胰腺中的nestin+并對其進行分離、體外增殖、誘導分化及克隆成為人們研究的熱點之一。本文綜述巢蛋白在胰腺中的表達及相關研究進展。
1.巢蛋白在胰腺中的分布及定性、定位
1.巢蛋白在胰腺中的分布及定性、定位
1.1 巢蛋白在大鼠胰腺中的分布及定性、定位
1.1 巢蛋白在大鼠胰腺中的分布及定性、定位
2000年Hunziker等[1]首先發現在胰腺內有nestin+。Zulewski等[3]發現，成年大鼠的nestin+位于胰島及散在腺泡周圍的外分泌部中。胰島來源的巢蛋白可以參與胰島內分泌細胞的新生。該細胞在胰島和導管內不同于導管上皮細胞，因其不表達導管標志物CK219。為進一步明確在大鼠胰腺中nestin+的類型，Lardon 等[4] 通過免疫組化發現，nestin+定位在正常和再生成年胰腺的間充質細胞內。在導管結扎所致的胰腺炎大鼠中，每個胰島至少含有2～3個nestin+。大多數細胞有星形細胞的形態，一種典型的與血管相關的外周細胞。另外，nestin+也存在于胰腺再生過程中的新生毛細血管的內皮細胞。在胰腺組織移植時，nestin+在間充質迅速增生，并表達結蛋白、波形蛋白，GFAP(代表星形細胞標志物) 。巢蛋白也是星形細胞、增生時的血管源性內皮細胞的標志物。國內倪雪峰[5]等研究顯示在大鼠胚胎后期、新生期、成年三階段nestin在核酸、蛋白水平均有表達，nestin +主要分布在胰島，在腺泡周圍的外分泌中有少量分布。隨大鼠胰腺的生長發育，nestin核酸、蛋白表達下調，胰島內nestin+數也呈下降趨勢。
2000年Hunziker等[1]首先發現在胰腺內有nestin+。Zulewski等[3]發現，成年大鼠的nestin+位于胰島及散在腺泡周圍的外分泌部中。胰島來源的巢蛋白可以參與胰島內分泌細胞的新生。該細胞在胰島和導管內不同于導管上皮細胞，因其不表達導管標志物CK219。為進一步明確在大鼠胰腺中nestin+的類型，Lardon 等[4] 通過免疫組化發現，nestin+定位在正常和再生成年胰腺的間充質細胞內。在導管結扎所致的胰腺炎大鼠中，每個胰島至少含有2～3個nestin+。大多數細胞有星形細胞的形態，一種典型的與血管相關的外周細胞。另外，nestin+也存在于胰腺再生過程中的新生毛細血管的內皮細胞。在胰腺組織移植時，nestin+在間充質迅速增生，并表達結蛋白、波形蛋白，GFAP(代表星形細胞標志物) 。巢蛋白也是星形細胞、增生時的血管源性內皮細胞的標志物。國內倪雪峰[5]等研究顯示在大鼠胚胎后期、新生期、成年三階段nestin在核酸、蛋白水平均有表達，nestin +主要分布在胰島，在腺泡周圍的外分泌中有少量分布。隨大鼠胰腺的生長發育，nestin核酸、蛋白表達下調，胰島內nestin+數也呈下降趨勢。
1.2 巢蛋白在小鼠胰腺中分布及定性、定位
1.2 巢蛋白在小鼠胰腺中分布及定性、定位
為明確巢蛋白在小鼠胰腺中的定位，Selander等[6]發現nestin+在間充質中表達，上皮細胞中不表達。早期胰腺干細胞的標志物IPF1PPDX1，祖細胞的標志物ngn3；胰腺分化細胞的標志物Isl1均表達在上皮鈣連素陽性的上皮細胞內，但不表達巢蛋白。nestin+在包繞胰腺上皮和正在發育的胃腸來源的上皮周圍，但不在胰腺上皮細胞內。從而支持nestin+不同于導管上皮內的觀點。
為明確巢蛋白在小鼠胰腺中的定位，Selander等[6]發現nestin+在間充質中表達，上皮細胞中不表達。早期胰腺干細胞的標志物IPF1PPDX1，祖細胞的標志物ngn3；胰腺分化細胞的標志物Isl1均表達在上皮鈣連素陽性的上皮細胞內，但不表達巢蛋白。nestin+在包繞胰腺上皮和正在發育的胃腸來源的上皮周圍，但不在胰腺上皮細胞內。從而支持nestin+不同于導管上皮內的觀點。
1.3 巢蛋白在人胚胎和成人胰腺中的分布及定性、定位
1.3 巢蛋白在人胚胎和成人胰腺中的分布及定性、定位
鄭宗梅等[7]研究顯示nestin和Ngn3在12～14周人胚胎胰腺組織均廣泛表達，該陽性細胞中均無胰島素及胰高血糖素表達；在胰島中未見到該二者的共表達，但在導管中可見共表達。說明nestin和Ngn3在人胚胎胰腺未分化細胞中表達，而具有分泌功能的內分泌細胞無表達。夏修金[8]等發現16周人胚胎胰腺的胰島以及胰導管和腺泡結構中檢測到nestin+，以腺泡結構和小導管中的數目為多。部分胰島素和CK19染色強陽性的細胞中巢蛋白染色為弱陽性，胰升糖素強陽性的部位則未見nestin+。認為nestin+可能是胰腺組織中一個特殊的細胞亞群，代表了一群未成熟細胞。楊開明[9]等研究顯示人胚胎6～14 w胰腺中nestin+存在于胰腺的間質，數量極少，認為胚胎胰腺的發育中，胰腺間質存在胰腺干細胞。我們的實驗顯示各胎齡段(10 ~ 37 w)胰腺均有nestin+表達，存在于胰島、間充質和血管中，在腺泡、導管中未發現nestin+，胚胎發育晚期階段（29 ~ 37 w）nestin+高于其它胎齡組。因此隨著胎齡的變化，胰腺nestin+數也發生了變化[10]。
鄭宗梅等[7]研究顯示nestin和Ngn3在12～14周人胚胎胰腺組織均廣泛表達，該陽性細胞中均無胰島素及胰高血糖素表達；在胰島中未見到該二者的共表達，但在導管中可見共表達。說明nestin和Ngn3在人胚胎胰腺未分化細胞中表達，而具有分泌功能的內分泌細胞無表達。夏修金[8]等發現16周人胚胎胰腺的胰島以及胰導管和腺泡結構中檢測到nestin+，以腺泡結構和小導管中的數目為多。部分胰島素和CK19染色強陽性的細胞中巢蛋白染色為弱陽性，胰升糖素強陽性的部位則未見nestin+。認為nestin+可能是胰腺組織中一個特殊的細胞亞群，代表了一群未成熟細胞。楊開明[9]等研究顯示人胚胎6～14 w胰腺中nestin+存在于胰腺的間質，數量極少，認為胚胎胰腺的發育中，胰腺間質存在胰腺干細胞。我們的實驗顯示各胎齡段(10 ~ 37 w)胰腺均有nestin+表達，存在于胰島、間充質和血管中，在腺泡、導管中未發現nestin+，胚胎發育晚期階段（29 ~ 37 w）nestin+高于其它胎齡組。因此隨著胎齡的變化，胰腺nestin+數也發生了變化[10]。
郭宏波[12]等研究發現，nestin+在正常成人胰腺組織中的分布最強在于胰島內，胰腺外分泌部未見明確的nestin+。Tino[13]等應用免疫組織化學雙重染色檢測。發現nestin在胰島、外分泌部中均存在，在胰島的內分泌細胞、腺泡和導管中沒有陽性細胞，所有nestin+共表達CD31、CD105、CD34和波形蛋白，出現在圍繞導管上皮細胞周圍的結締組織血管內皮中，但不存在于導管上皮。nestin+在成人胰腺中表達在血管內皮細胞，因此它在成人胰腺中不代表表達內分泌祖細胞的標志物。
郭宏波[12]等研究發現，nestin+在正常成人胰腺組織中的分布最強在于胰島內，胰腺外分泌部未見明確的nestin+。Tino[13]等應用免疫組織化學雙重染色檢測。發現nestin在胰島、外分泌部中均存在，在胰島的內分泌細胞、腺泡和導管中沒有陽性細胞，所有nestin+共表達CD31、CD105、CD34和波形蛋白，出現在圍繞導管上皮細胞周圍的結締組織血管內皮中，但不存在于導管上皮。nestin+在成人胰腺中表達在血管內皮細胞，因此它在成人胰腺中不代表表達內分泌祖細胞的標志物。
2.胰腺nestin+的分離與分化
2.胰腺nestin+的分離與分化
2.1 大鼠胰腺nestin+的分離與分化
2.1 大鼠胰腺nestin+的分離與分化
Zulewski等[3]發現，成年大鼠胰島內的nestin+在體外培養( > 8個月) ，有不同尋常的多潛能增生能力，可以反復克隆。經誘導分化可以表達肝、外分泌胰腺的標志物：甲胎蛋白、淀粉酶；顯示導管P內皮形態：表達CK219；分化為內分泌細胞，表達胰島素、胰高血糖素、胰腺十二指腸同源盒轉錄因子( IDX21) 。巢蛋白可以作為多潛能的胰腺干細胞的標志。
Zulewski等[3]發現，成年大鼠胰島內的nestin+在體外培養( > 8個月) ，有不同尋常的多潛能增生能力，可以反復克隆。經誘導分化可以表達肝、外分泌胰腺的標志物：甲胎蛋白、淀粉酶；顯示導管P內皮形態：表達CK219；分化為內分泌細胞，表達胰島素、胰高血糖素、胰腺十二指腸同源盒轉錄因子( IDX21) 。巢蛋白可以作為多潛能的胰腺干細胞的標志。
2.2 小鼠胰腺nestin+的分離與分化
2.2 小鼠胰腺nestin+的分離與分化
Lumelsky 等[2]通過篩選巢蛋白陽性的胚胎干細胞(ES)，體外經誘導分化后，可產生分泌胰島素的內分泌細胞。當將這些分化的細胞注射入糖尿病小鼠，分泌胰島素的細胞可以迅速血管化，形成胰島樣組織。葉健等[13]以lV型膠原酶消化小鼠胰腺組織進行低糖DMEM培養基進行體外連續培養。隨著培養時間的延長，從內分泌部分離的nestin+呈集落樣生長，開始表達PDX21，呈現向胰腺內分泌部的B細胞分化的趨勢。來源于胰腺外分泌部的nestin+呈鋪路石樣形態，表達導管上皮細胞的特異性標志CK219，呈現向胰腺外分泌部的導管上皮細胞分化的趨勢。同一細胞集落中發生分化的胰腺nestin+亦隨時間延長逐漸增多。
Lumelsky 等[2]通過篩選巢蛋白陽性的胚胎干細胞(ES)，體外經誘導分化后，可產生分泌胰島素的內分泌細胞。當將這些分化的細胞注射入糖尿病小鼠，分泌胰島素的細胞可以迅速血管化，形成胰島樣組織。葉健等[13]以lV型膠原酶消化小鼠胰腺組織進行低糖DMEM培養基進行體外連續培養。隨著培養時間的延長，從內分泌部分離的nestin+呈集落樣生長，開始表達PDX21，呈現向胰腺內分泌部的B細胞分化的趨勢。來源于胰腺外分泌部的nestin+呈鋪路石樣形態，表達導管上皮細胞的特異性標志CK219，呈現向胰腺外分泌部的導管上皮細胞分化的趨勢。同一細胞集落中發生分化的胰腺nestin+亦隨時間延長逐漸增多。
2.3 人胰腺nestin+的分離與分化
2.3 人胰腺nestin+的分離與分化
鑒于多數學者認為巢蛋白是胰腺干細胞，如能提取人胰腺中nestin+并進行分離培養、體外增殖及功能誘導，若能分化為B細胞，則是解決胰島供體短缺的有效途徑。張玲[15]等采用膠原酶消化法，從胎兒胰腺組織中分離獲得胰島樣細胞簇(ICCs)，發現ICCs細胞具有很強的增殖能力，可至少連續傳16代；可表達巢蛋白和ABCG2；在多種細胞因子和無血清的條件下，nestin+經誘導后可出現胰島素、胰升糖素和PDX21mRNA的表達，而巢蛋白和Ngn3mRNA表達消失。RIA分析也可檢測到誘導后的細胞內有胰島素產生。因此從胎兒胰腺中分離得到的nestin+具有胰腺前體細胞的特性，在體外具有很強的增殖能力，并可誘導分化為胰島內分泌細胞。nestin+有望為胰島移植提供一種新的細胞來源。國外學者已從成人胰管中分離出nestin+并進行培養，成功地誘導分化出了既含胰管細胞又含胰島細胞的細胞群[15]，證實胰腺外分泌部存在著巢蛋白陽性的干細胞。王宏[16]等從胎兒胰中分離的nestin+進行篩選后擴增，純化后的其表面標志與骨髓間充質干細胞表面標志相似，此類細胞可在體外誘導為脂肪細胞或骨細胞，胎兒胰腺來源的nestin+具有一定間充質干細胞的特性。黃海霞[17]等對人胎胰腺中有nestin+進行分離和體外培養，發現胎胰nestin+表達高水平ABCG2/BCRPI，并在形態和生長方式上均不同于導管上皮細胞；nestin+在體外可自發形成ICC，ICC中的nestin+具有多向分化潛能，可表達多種細胞特異抗原，經體外誘導可產生少量胰島素陽性的類B細胞。并且ICC在NOD-Scid糖尿病模型小鼠和正常小鼠腎膜下移植，發現移植處有明顯的血管增生，ICC可使糖尿病小鼠血糖明顯降低，在正常小鼠體內分化為多種結構，同時繼續增殖侵入腎實質。鄭宗梅[18]等用Ⅴ型膠原酶消化胚胎胰腺，獲得貼壁生長的人胚胰腺細胞，觀察其原代培養、傳代培養、增殖能力及體外誘導分化能力，結果人胚胎胰腺可以體外分離獲得nestin和Ngn3陽性細胞，為未分化細胞，能在體外大量擴增，可長期培養，總蛋白中有胰島素表達，有分化為nestin+的潛能，有望為胰腺組織工程移植提供足夠的種子細胞。
鑒于多數學者認為巢蛋白是胰腺干細胞，如能提取人胰腺中nestin+并進行分離培養、體外增殖及功能誘導，若能分化為B細胞，則是解決胰島供體短缺的有效途徑。張玲[15]等采用膠原酶消化法，從胎兒胰腺組織中分離獲得胰島樣細胞簇(ICCs)，發現ICCs細胞具有很強的增殖能力，可至少連續傳16代；可表達巢蛋白和ABCG2；在多種細胞因子和無血清的條件下，nestin+經誘導后可出現胰島素、胰升糖素和PDX21mRNA的表達，而巢蛋白和Ngn3mRNA表達消失。RIA分析也可檢測到誘導后的細胞內有胰島素產生。因此從胎兒胰腺中分離得到的nestin+具有胰腺前體細胞的特性，在體外具有很強的增殖能力，并可誘導分化為胰島內分泌細胞。nestin+有望為胰島移植提供一種新的細胞來源。國外學者已從成人胰管中分離出nestin+并進行培養，成功地誘導分化出了既含胰管細胞又含胰島細胞的細胞群[15]，證實胰腺外分泌部存在著巢蛋白陽性的干細胞。王宏[16]等從胎兒胰中分離的nestin+進行篩選后擴增，純化后的其表面標志與骨髓間充質干細胞表面標志相似，此類細胞可在體外誘導為脂肪細胞或骨細胞，胎兒胰腺來源的nestin+具有一定間充質干細胞的特性。黃海霞[17]等對人胎胰腺中有nestin+進行分離和體外培養，發現胎胰nestin+表達高水平ABCG2/BCRPI，并在形態和生長方式上均不同于導管上皮細胞；nestin+在體外可自發形成ICC，ICC中的nestin+具有多向分化潛能，可表達多種細胞特異抗原，經體外誘導可產生少量胰島素陽性的類B細胞。并且ICC在NOD-Scid糖尿病模型小鼠和正常小鼠腎膜下移植，發現移植處有明顯的血管增生，ICC可使糖尿病小鼠血糖明顯降低，在正常小鼠體內分化為多種結構，同時繼續增殖侵入腎實質。鄭宗梅[18]等用Ⅴ型膠原酶消化胚胎胰腺，獲得貼壁生長的人胚胰腺細胞，觀察其原代培養、傳代培養、增殖能力及體外誘導分化能力，結果人胚胎胰腺可以體外分離獲得nestin和Ngn3陽性細胞，為未分化細胞，能在體外大量擴增，可長期培養，總蛋白中有胰島素表達，有分化為nestin+的潛能，有望為胰腺組織工程移植提供足夠的種子細胞。
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3.結束語
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結合文獻資料，認為巢蛋白是在胚胎胰腺發育過程中存在的胰腺干細胞，也代表著胰腺的增殖水平。從人胚胎后期胰島中可分離得到更多的巢蛋白陽性干細胞，更容易獲得大量的干細胞而進行篩選、體外培養及誘導分化，從而為糖尿病胰腺干細胞移植提供了更多的細胞來源。
結合文獻資料，認為巢蛋白是在胚胎胰腺發育過程中存在的胰腺干細胞，也代表著胰腺的增殖水平。從人胚胎后期胰島中可分離得到更多的巢蛋白陽性干細胞，更容易獲得大量的干細胞而進行篩選、體外培養及誘導分化，從而為糖尿病胰腺干細胞移植提供了更多的細胞來源。
參考文獻：
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[1]Hunziker，Stein M．nestin expressing cells in the pancreatic islets of Langerhans[J]．Biochem Biophys Res Commun，2000，271（1）：116-119．
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[3]Zulewski H，Abraham EJ，Gerlach MJ， et al .Multipotential nestin-positive stem cells isolated frompancreatic islets differentiate Ex vivo into pancreatic endocrine ，exocrine ，and hepatic phenotypes [J]. Diabetes，2001，50(3) :521-533.
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[4]Lardon J，Rooman I，Bouwens L. Nestin expression in pancreatic stellate cells and angiogenic endothelial cells [J] . Histochem Cell Biol，2002，117(6) :535-540.
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[5]倪雪峰,袁 櫟,程志祥,等.巢蛋白在大鼠胚胎、新生及成年胰腺中的表達變化[J].第四軍醫大學學報,2004 ,25(3):193-196
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[6]Selander L，Edlund H. Nestin is expressed in mesenchymal and not epithelial cells of the developing mouse pancreas [J]. Mech Dev，2002，113(2) :189-192.
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[7]鄭宗梅，陳東明，李凌松，等.巢蛋白和神經元素3在人胚胎胰腺中的表達和分布[J].中華外科雜志，2005，43（23）：1537-1540．
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[8]夏修金，鮑衛漢，陳東明，等．巢蛋白在人胚胎胰腺中的表達[J].中國糖尿病雜志，2003， 11(3)：204-207．
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[9]楊開明，李愛冬，羊惠君，等．Nestin、CK19及insulin等在胚胎胰腺發育中的表達[J]．細胞與分子免疫學雜志，2005，21 (3)：353-355．
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[10]楊最素，江 峰，郁迪，等.人胚胎胰發育中巢蛋白和轉化生長因子β1表達的變化[J]．解剖學雜志，2010，34（3）：311-314．
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[11]郭宏波，徐秀紅，張玉海.巢蛋白免疫陽性細胞在成人胰腺中的分布[J].臨床和實驗醫學雜志，2002，1（14）：218-219．
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[12]Tino Klein,Zhidong Ling,Harry Heimberg,et al. Nestin Is Expressed in Vascular Endothelial Cells in the Adult Human Pancreas[J].J Histochem Cytochem, 2003,51(6):697-706.
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[13]葉健，何少健，劉瓊東，等.新生昆明小鼠胰腺巢蛋白陽性細胞的自然分化[J].中國組織工程研究與臨床康復，2009，13(14)：2680-2684．
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[14]張玲，洪天配，胡江，等．胎兒胰腺組織中巢蛋白陽性細胞的分離和體外增殖以及誘導分化[J].中國糖尿病雜志，2003，11（6）：414-419.
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[15]Bonner - Weir S, Taneja M, Weir GC, et al.In vitrocultivation of human islets from expanded ductal tissue[J]．Proc Natl Acad Sci USA,2000,97 (14): 7999-8004.
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[16]王宏，胡江，李凌松，等.篩選后的巢蛋白陽性細胞流式鑒定及誘導分化[J].中國醫學科學院學報，2005，27（6）：683-688
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[17]黃海霞，陳玉英，倉輝，等.人胎胰巢蛋白陽性細胞的分離培養及其生物學特性研究[J].實驗生物學報，2003，36(1)；25-31．
[17]黃海霞，陳玉英，倉輝，等.人胎胰巢蛋白陽性細胞的分離培養及其生物學特性研究[J].實驗生物學報，2003，36(1)；25-31．
[18]鄭宗梅，陳東明，李凌松，等.體外培養及其誘導分化人胚胰腺巢蛋白和神經元素3陽性細胞的實驗.中國臨床康復，2005，269（9）：62-67．
[18]鄭宗梅，陳東明，李凌松，等.體外培養及其誘導分化人胚胰腺巢蛋白和神經元素3陽性細胞的實驗.中國臨床康復，2005，269（9）：62-67．
作者簡介：
作者簡介：
甘西西（1962-），女，漢，湖北咸豐，浙江海洋學院醫學院，高級講師。
甘西西（1962-），女，漢，湖北咸豐，浙江海洋學院醫學院，高級講師。
楊最素（1967-），女，漢，浙江定海，浙江海洋學院醫學院，副教授，碩士生導師。
楊最素（1967-），女，漢，浙江定海，浙江海洋學院醫學院，副教授，碩士生導師。
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3.結束語
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結合文獻資料，認為巢蛋白是在胚胎胰腺發育過程中存在的胰腺干細胞，也代表著胰腺的增殖水平。從人胚胎后期胰島中可分離得到更多的巢蛋白陽性干細胞，更容易獲得大量的干細胞而進行篩選、體外培養及誘導分化，從而為糖尿病胰腺干細胞移植提供了更多的細胞來源。
結合文獻資料，認為巢蛋白是在胚胎胰腺發育過程中存在的胰腺干細胞，也代表著胰腺的增殖水平。從人胚胎后期胰島中可分離得到更多的巢蛋白陽性干細胞，更容易獲得大量的干細胞而進行篩選、體外培養及誘導分化，從而為糖尿病胰腺干細胞移植提供了更多的細胞來源。
參考文獻：
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[18]鄭宗梅，陳東明，李凌松，等.體外培養及其誘導分化人胚胰腺巢蛋白和神經元素3陽性細胞的實驗.中國臨床康復，2005，269（9）：62-67．
[18]鄭宗梅，陳東明，李凌松，等.體外培養及其誘導分化人胚胰腺巢蛋白和神經元素3陽性細胞的實驗.中國臨床康復，2005，269（9）：62-67．
作者簡介：
作者簡介：
甘西西（1962-），女，漢，湖北咸豐，浙江海洋學院醫學院，高級講師。
甘西西（1962-），女，漢，湖北咸豐，浙江海洋學院醫學院，高級講師。
